DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) ହେଉଛି ଏକ ଏଣ୍ଡୋଡକ୍ସାଇରିବୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ଯାହା ଏକକ କିମ୍ବା ଦୁଇଗୁଣ DNA ହଜମ କରିପାରିବ |ଏହା ଫସଫୋଡିଏଷ୍ଟର୍ ବଣ୍ଡକୁ ଚିହ୍ନିଥାଏ ଏବଂ ମୋନୋଡେକ୍ସାଇନୁକ୍ଲାଏଟାଇଡ୍ କିମ୍ବା ଏକକ କିମ୍ବା ଦୁଇଗୁଣ ବିଶିଷ୍ଟ ଅଲିଗୋଡକ୍ସାଇନୁକ୍ଲାଏଟାଇଡ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରି 5′-ଟର୍ମିନାଲରେ ଫସଫେଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ 3′-ଟର୍ମିନାଲରେ ହାଇଡ୍ରକ୍ସିଲ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିଥାଏ |DNase I ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ Ca2 + ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ ଏବଂ Mn2 + ଏବଂ Zn2 + ପରି ବିଭାଜିତ ଧାତୁ ଆୟନ ଦ୍ୱାରା ସକ୍ରିୟ ହୋଇପାରିବ |5mM Ca2 + ଏନଜାଇମକୁ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ରୁ ରକ୍ଷା କରିଥାଏ |Mg2 + ର ଉପସ୍ଥିତିରେ, ଏନଜାଇମ୍ ଅନିୟମିତ ଭାବରେ DNA ର ଯେକ any ଣସି ସ୍ଥାନରେ ଯେକ site ଣସି ସାଇଟ୍ ଚିହ୍ନିପାରେ |Mn2 + ର ଉପସ୍ଥିତିରେ, DNA ର ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ଏକାସାଙ୍ଗରେ ଚିହ୍ନିତ ହୋଇ ପ୍ରାୟ ସମାନ ସ୍ଥାନରେ ଫ୍ଲାଟ ଏଣ୍ଡ୍ DNA ଖଣ୍ଡ କିମ୍ବା 1-2 ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ସହିତ ଷ୍ଟିକ୍ ଏଣ୍ଡ୍ DNA ଖଣ୍ଡ ଗଠନ ପାଇଁ ଚିହ୍ନିତ ହୋଇପାରେ |
ଉତ୍ପାଦ ସମ୍ପତ୍ତି |
ବୋଭାଇନ୍ ଅଗ୍ନାଶୟ DNase I ଖମୀର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ପ୍ରଣାଳୀରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା |
Cଉପାଦାନଗୁଡିକ
| ଉପାଦାନ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase ମୁକ୍ତ | | 20μL | 200μL | 1 ମି | 10mL |
| 10 × DNase I ବଫର୍ | | 1 ମି | 1 ମି | 5 × 1mL | 5 × 10mL |
ପରିବହନ ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ
1. ସଂରକ୍ଷଣ ସ୍ଥିରତା: - ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ 15 ℃ ~ -25;;
2. ଟ୍ରାନ୍ସପୋର୍ଟ ସ୍ଥିରତା: ବରଫ ପ୍ୟାକ୍ ତଳେ ପରିବହନ;
3. ଯୋଗାଇ ଦିଆଯାଉଛି: 10 ମିଟର Tris-HCl, 2 mM CaCl |2, 25 at ରେ 50% ଗ୍ଲାଇସେରଲ୍, pH 7.6 |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍କୁ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି ଯାହାକି 1 µg pBR322 DNA କୁ 10 ମିନିଟରେ 37 ° C ରେ ଖରାପ କରିଦେବ |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
RNase:37U ରେ 4 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 1.6 μg MS2 RNA ସହିତ 5U DNase I କ no ଣସି ଅବକ୍ଷୟ କରେ ନାହିଁ ଯେପରି ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |
ଜୀବାଣୁ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍:ଚାଇନିଜ୍ ଫାର୍ମାକୋପିୟା IV 2020 ସଂସ୍କରଣ ଅନୁଯାୟୀ LAL- ପରୀକ୍ଷା, ଜେଲ୍ ସୀମା ପରୀକ୍ଷା ପଦ୍ଧତି, ସାଧାରଣ ନିୟମ (1143) |ଜୀବାଣୁ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ ବିଷୟବସ୍ତୁ ≤10 EU / mg ହେବା ଉଚିତ୍ |
ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ |
ନିମ୍ନରେ ତାଲିକାଭୁକ୍ତ ଅନୁପାତ ଅନୁଯାୟୀ RNase ମୁକ୍ତ ଟ୍ୟୁବରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ:
| ଉପାଦାନ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I ବଫର୍ | | 1 μL |
| DNase I, RNase ମୁକ୍ତ (5U / μL) | Rg RNA ପ୍ରତି 1 U | |
| ddH2O | 10 μL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |
2.37 15 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ;
3. ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ବନ୍ଦ କରିବା ପାଇଁ ଟର୍ମିନେସନ୍ ବଫର୍ ଯୋଡନ୍ତୁ, ଏବଂ DNase I କୁ ନିଷ୍କ୍ରିୟ କରିବା ପାଇଁ 65 at ରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଗରମ କରନ୍ତୁ | ନମୁନାକୁ ପରବର୍ତ୍ତୀ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ସିଧାସଳଖ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
ଟିପ୍ପଣୀ |
1. RNA ର 1U DNase I କୁ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, କିମ୍ବା 1μg ରୁ କମ୍ RNA ପାଇଁ 1U DNase I ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |
ଏନ୍ଜାଇମ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ସମୟରେ RNA କୁ ଅବକ୍ଷୟରୁ ରକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ 2.EDTA କୁ 5 ମିଟରର ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତାରେ ଯୋଡାଯିବା ଉଚିତ |
