ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ RNA (dsRNA) ଏଲିସା କିଟ୍ |
ଏହି କିଟ୍ ହେଉଛି ଏକ ଏନଜାଇମ୍-ଲିଙ୍କ୍ ହୋଇଥିବା ଇମ୍ୟୁନୋସର୍ବାଣ୍ଟ ଆସେ (ELISA) ବାୟୋଟିନ୍-ଷ୍ଟ୍ରେପଟାଭିଡିନ ସିଷ୍ଟମ୍ ସହିତ ଯୋଡି ହୋଇ, କ୍ରମକୁ ଖାତିର ନକରି 60 ବେସ୍ ଯୋଡି (ବିପି) ରୁ ଅଧିକ ଲମ୍ବ ଥିବା dsRNA ର ପରିମାଣିକ ମାପ ପାଇଁ |ପ୍ଲେଟକୁ ଆଣ୍ଟି- dsRNA ଆଣ୍ଟିବଡି ସହିତ ପୂର୍ବରୁ ଆବୃତ କରାଯାଇଛି |ନମୁନାରେ ଉପସ୍ଥିତ dsRNA ଯୋଗ କରାଯାଇଥାଏ ଏବଂ କୂଅରେ ଆବୃତ ଆଣ୍ଟିବଡି ସହିତ ବାନ୍ଧେ |ଏବଂ ତା’ପରେ ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଆଣ୍ଟି- dsRNA ଆଣ୍ଟିବଡି ଯୋଗ କରାଯାଇଥାଏ ଏବଂ ନମୁନାରେ dsRNA ସହିତ ବାନ୍ଧେ |ଧୋଇବା ପରେ, HRP-Streptavidin ଯୋଗ କରାଯାଇ ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଆଣ୍ଟି- dsRNA ଆଣ୍ଟିବଡି ସହିତ ବାନ୍ଧେ |ଇନକ୍ୟୁବେସନ ଅନ୍ବାଉଣ୍ଡ HRP-Streptavidin ଧୋଇଯାଏ |ତାପରେ ଟିଏମବି ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ HRP ଦ୍ added ାରା ଯୋଡି ହୋଇ କାଟାଲାଇଜ୍ ହୋଇ ଏକ ନୀଳ ରଙ୍ଗର ଉତ୍ପାଦ ଉତ୍ପାଦନ କରେ ଯାହା ଅମ୍ଳୀୟ ଷ୍ଟପ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଗ କରିବା ପରେ ହଳଦିଆ ରଙ୍ଗରେ ପରିଣତ ହେଲା |ହଳଦିଆ ର ଘନତା ପ୍ଲେଟରେ ଧରାଯାଇଥିବା dsRNA ର ଲକ୍ଷ୍ୟ ପରିମାଣ ସହିତ ଆନୁପାତିକ |ଅବଶୋଷଣ 450 nm ରେ ମାପ କରାଯାଏ |
ଆବେଦନ
ଏହି କିଟ୍ ଅବଶିଷ୍ଟ dsRNA ର ପରିମାଣିକ ମାପ ପାଇଁ |
କିଟ୍ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
|
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | HCP0033A-1 | HCP0033A-2 |
| 1 | ଏଲିସା ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ | | 8 × 6 | 8 × 12 |
| 2 | ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଡିଟେକସନ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି (100x) | 60μL | 120μL |
| 3 | Hrp-Streptavidin (100x) | 60μL | 120μL |
| 4 | ଦିଲ୍ୟୁସନ୍ ବଫର୍ | | 15mL | 30mL |
| 5 | Tmb ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସମାଧାନ | | 6mL | 12mL |
| 6 | ସମାଧାନ ବନ୍ଦ କରନ୍ତୁ | | 3mL | 6mL |
| 7 | ଏକାଗ୍ର ୱାଶ୍ ବଫର୍ (20x) | 20mL | 40mL |
| 8 | ମାନକ (UTP, 5ng / μL) | 7.5μL | 15μL |
| 9 | ମାନକ (pUTP, 5ng / μL) | 7.5μL | 15μL |
| 10 | ମାନକ (N1-Me-pUTP, 5ng / μL) | 7.5μL | 15μL |
| 11 | ମାନକ (5-OMe-UTP, 5ng / μL) | 7.5μL | 15μL |
| 12 | STE ବଫର୍ | | 25mL | 50mL |
| 13 | ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ | | 2 ଖଣ୍ଡ | | 4 ଖଣ୍ଡ | |
| 14 | ନିର୍ଦ୍ଦେଶନାମା ଏବଂ COA | | 1 କପି | 1 କପି |
ସଂରକ୍ଷଣ ଏବଂ ସ୍ଥିରତା |
1. ଅବ୍ୟବହୃତ କିଟ୍ ପାଇଁ: ପୁରା କିଟ୍ ସେଲ ଲାଇଫରେ 2 ~ 8 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରେ |ସଂରକ୍ଷଣ ସ୍ଥିରତା ପାଇଁ ଦୃ light ଆଲୋକକୁ ଏଡାଇବା ଉଚିତ୍ |
2. ବ୍ୟବହୃତ କିଟ୍ ପାଇଁ: ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ଖୋଲିବା ପରେ, ଦୟାକରି ଅବ୍ୟବହୃତ କୂଅଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ ସହିତ ଘୋଡାନ୍ତୁ ଏବଂ ଡେସିକାଣ୍ଟ ପ୍ୟାକ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଫଏଲ୍ ଥଳିକୁ ଫେରନ୍ତୁ, ଫଏଲ୍ ଥଳିକୁ ଜିପ୍-ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପରେ ଯଥାଶୀଘ୍ର 2 ~ 8 return କୁ ଫେରନ୍ତୁ |ଅନ୍ୟ ରିଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର ପରେ ଯଥାଶୀଘ୍ର 2 ~ 8 to କୁ ଫେରାଇ ଦିଆଯିବା ଉଚିତ୍ |
ସାମଗ୍ରୀ ଆବଶ୍ୟକ କିନ୍ତୁ ଯୋଗାଇ ଦିଆଯାଉ ନାହିଁ |
1. 450 ± 10nm ଫିଲ୍ଟର୍ ସହିତ ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର୍ (ଯଦି 450 ଏବଂ 650 nm ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟରେ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ ଭଲ) |
2. ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ଶେକର୍ |
3. RNase ମୁକ୍ତ ଟିପ୍ସ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ |
ଅପରେସନ୍ ଫ୍ଲୋଚାର୍ଟ |
ଆପଣ ଆରମ୍ଭ କରିବା ପୂର୍ବରୁ
1. ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ସମସ୍ତ କିଟ୍ ଉପାଦାନ ଏବଂ ନମୁନାକୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ (18-25 ℃) ଆଣନ୍ତୁ |ଯଦି କିଟ୍ ଏକ ସମୟରେ ବ୍ୟବହୃତ ହେବ ନାହିଁ, ଦୟାକରି ବର୍ତ୍ତମାନର ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ କେବଳ ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ ଏବଂ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ବାହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ ଏବଂ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ଆବଶ୍ୟକ ଅବସ୍ଥାରେ ଛାଡିଦିଅନ୍ତୁ |
2. ବଫର୍ ଧୋଇବା: m ୦ ମି.ଲି.
3. ମାନକ: ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଷ୍ଟକ୍ ସମାଧାନକୁ ସଂକ୍ଷେପରେ ସ୍ପିନ୍ କିମ୍ବା ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କରନ୍ତୁ |ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିବା ଚାରୋଟି ମାନାଙ୍କ ଏକାଗ୍ରତା ହେଉଛି 5ng / μL |UTP ଏବଂ pUTP dsRNA ମାନାଙ୍କ ପାଇଁ, ଦୟାକରି ଷ୍ଟକ୍ ସମାଧାନକୁ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର ଆଙ୍କିବା ପାଇଁ STE ବଫର୍ ସହିତ 1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312,0.0156,0pg / μL କୁ ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ |N1-Me-pUTP dsRNA ମାନାଙ୍କ ପାଇଁ, ଦୟାକରି ଷ୍ଟକ୍ ସମାଧାନକୁ 2,1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312, 0pg / μL ରେ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର ଆଙ୍କିବା ପାଇଁ STE ବଫର୍ ସହିତ ମିଶାନ୍ତୁ |5-OMe-UTP dsRNA ମାନକ ପାଇଁ, ଦୟାକରି ଷ୍ଟକ୍ ସମାଧାନକୁ 4,2,1,0.5, 0.25,0.125,0.0625, 0pg / μL ରେ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର ଆଙ୍କିବା ପାଇଁ STE ବଫର୍ ସହିତ ମିଶାନ୍ତୁ |ନିମ୍ନଲିଖିତ ଚାର୍ଟ ପରି ମାନକକୁ ହ୍ରାସ କରାଯାଇପାରିବ ବୋଲି ଆମେ ସୁପାରିଶ କରୁ:
|
N1-Me-pUTP dsRNA ମାନକ | | |||
|
ନା। |
ଅନ୍ତିମ କନ। (pg/ μL) | ଦିଲ୍ୟୁସନ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ | |
| STE ବଫର୍ |
ମାନକ | ||
|
A
B C D E F G H | 100
2
1 0.5। 0.5 0.25 0. 125 0.0625 0.0312 0 | 49μL
490μL
250μL 250μL 250μL 250μL 250μL 250μL 250μL | 1μL 5ng / μL ମାନକ | 10μL 100pg / μL | ସମାଧାନ 250μL ସମାଧାନ A। 250μL ସମାଧାନ B। 250μL ସମାଧାନ C 250μL ସମାଧାନ D। 250μL ସମାଧାନ ଇ 250μL ସମାଧାନ F। / |
| 5-OMe-UTP dsRNA ମାନକ ପାଇଁ | | |||
|
ନା। |
ଅନ୍ତିମ କନ। (pg/ μL) | ଦିଲ୍ୟୁସନ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ | |
| STE ବଫର୍ |
ମାନକ | ||
|
A
B C D E F G H |
100
4
2 1 0.5। 0.5 0.25 0. 125 0.0625 0 |
49μL
480μL
250μL 250μL 250μL 250μL 250μL 250μL 250μL | 1μL 5ng / μL | ମାନକ 20μL 100pg / μL | ସମାଧାନ 250μL ସମାଧାନ A। 250μL ସମାଧାନ B। 250μL ସମାଧାନ C 250μL ସମାଧାନ D। 250μL ସମାଧାନ ଇ 250μL ସମାଧାନ F। / |
4. ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଚିହ୍ନଟ ଆଣ୍ଟିବଡି ଏବଂ HRP-streptavidin କାର୍ଯ୍ୟ ସମାଧାନ: ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଷ୍ଟକ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ କୁ ସଂକ୍ଷେପରେ ସ୍ପିନ୍ କିମ୍ବା ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କରନ୍ତୁ |ସେଗୁଡିକୁ ଦିଲ୍ୟୁସନ୍ ବଫର୍ ସହିତ କାର୍ଯ୍ୟର ଏକାଗ୍ରତାରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
5. ଟିଏମବି ସବଷ୍ଟେଟ୍: ଷ୍ଟେରିଲାଇଜଡ୍ ଟିପ୍ସ ସହିତ ସମାଧାନର ଆବଶ୍ୟକୀୟ ଡୋଜ୍ ଆକାଂକ୍ଷା କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ସମାଧାନକୁ ପୁନର୍ବାର ପାତ୍ରରେ ପକାନ୍ତୁ ନାହିଁ |ଟିଏମବି ସବଷ୍ଟେଟ୍ ଆଲୋକ ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳ, ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଆଲୋକରେ TMB ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଏକ୍ସପୋଜର୍ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |
ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି |
1. ଅନୁସନ୍ଧାନ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ ସଂଖ୍ୟା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରନ୍ତୁ |ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଫ୍ରେମରେ ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ସ ସନ୍ନିବେଶ କରନ୍ତୁ |ଏହି ଅନୁସନ୍ଧାନରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇନଥିବା ଅବଶିଷ୍ଟ ପ୍ଲେଟ୍ ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟାଗରେ ଡେସିକାଣ୍ଟ ସହିତ ପୁନ ack ପ୍ୟାକ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ |ଫ୍ରିଜ୍ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟାଗକୁ ଜୋରରେ ବନ୍ଦ କରନ୍ତୁ |
2. ଉପଯୁକ୍ତ କୂଅରେ ମାନକ, ଖାଲି ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତ୍ୟେକ ମିଶ୍ରଣକୁ 100μL ଯୋଡନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ ସହିତ ଘୋଡାନ୍ତୁ |500rpm ରେ କମ୍ପିବା ସହିତ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |ସଠିକ୍ ଅନୁଧ୍ୟାନ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଏକାଗ୍ରତା ପାଇଁ ନମୁନାଗୁଡିକ STE ବଫର୍ ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଉଚିତ |
3. ଷ୍ଟେପ୍ ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ: ସମାଧାନକୁ ଆକାଂକ୍ଷା କରନ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 250μL ୱାଶ୍ ବଫର୍ ସହିତ ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ 30 ଦଶକ ପାଇଁ ଛିଡା ହେବାକୁ ଦିଅନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟକୁ ଅବଶୋଷିତ କାଗଜରେ ଛିଣ୍ଡାଇ ଧୋଇବା ବଫରକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ପରିତ୍ୟାଗ କରନ୍ତୁ |ସମ୍ପୁର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ 4 ଥର ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ |
4. ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 100μL ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଚିହ୍ନଟ ଆଣ୍ଟିବଡି କାର୍ଯ୍ୟ ସମାଧାନ ମିଶାନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ ସହିତ ଘୋଡାନ୍ତୁ |500rpm ରେ କମ୍ପିବା ସହିତ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
5. ଧୋଇବା ପଦକ୍ଷେପକୁ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରନ୍ତୁ |
6. ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 100μL HRP-streptavidin କାର୍ଯ୍ୟ ସମାଧାନ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ ସହିତ ଘୋଡାନ୍ତୁ |500rpm ରେ କମ୍ପନ ସହିତ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
7. ଧୋଇବା ପଦକ୍ଷେପକୁ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରନ୍ତୁ |
8. ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 100μL TMB ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସମାଧାନ ମିଶାନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ ସହିତ ଘୋଡାନ୍ତୁ |RT ରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ ଆଲୋକରୁ ରକ୍ଷା କରନ୍ତୁ |ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଗ ଦ୍ୱାରା ତରଳ ନୀଳ ହୋଇଯିବ |
9. ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50μL ଷ୍ଟପ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ମିଶାନ୍ତୁ |ଷ୍ଟପ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଗ ଦ୍ୱାରା ତରଳ ହଳଦିଆ ହୋଇଯିବ |ତାପରେ ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର୍ ଚଲାନ୍ତୁ ଏବଂ ତୁରନ୍ତ 450nm ରେ ମାପ ପରିଚାଳନା କରନ୍ତୁ |
ଫଳାଫଳଗୁଡିକର ଗଣନା
1. ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାନକ, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ଏବଂ ନମୁନା ପାଇଁ ନକଲ ପଠନକୁ ହାରାହାରି କରନ୍ତୁ ଏବଂ ହାରାହାରି ଶୂନ ମାନକ ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ବାହାର କରନ୍ତୁ |ଭୂଲମ୍ବ (Y) ଅକ୍ଷରେ ଅବଶୋଷଣ ଏବଂ ଭୂସମାନ୍ତର (X） ଅକ୍ଷରେ dsRNA ଏକାଗ୍ରତା) ସହିତ ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ନିର୍ମାଣ କରନ୍ତୁ |
2. କମ୍ପ୍ୟୁଟର ଆଧାରିତ ବକ୍ର-ଫିଟିଂ ସଫ୍ଟୱେର୍ ସହିତ ଗଣନା କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି ଯେପରିକି ବକ୍ର ବିଶେଷଜ୍ଞ 1.3 କିମ୍ବା ELISA Calc 5 କିମ୍ବା 4 ପାରାମିଟର ଅଣ-ଲାଇନ୍ ଫିଟ୍ ମଡେଲରେ |
ପ୍ରଦର୍ଶନ
1. ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା:
ଚିହ୍ନଟର ନିମ୍ନ ସୀମା: ≤ 0.001pg / μL (UTP-, pUTP-, N1-Me-pUTP-dsRNA ପାଇଁ), ≤ 0.01pg / μL (5-OMe-UTP-dsRNA ପାଇଁ) |
ପରିମାଣର ନିମ୍ନ ସୀମା: 0.0156 pg / μL (UTP-, pUTP-dsRNA ପାଇଁ), 0.0312 pg / μL (N1-Me-pUTP-dsRNA ପାଇଁ), 0.0625 pg / μL (5-OMe-UTP-dsRNA ପାଇଁ) |
2. ସଠିକତା: ଇଣ୍ଟ୍ରା-ଆସେ ର CV ≤10%, ଇଣ୍ଟର-ଆସେ ର CV ≤10% |
3. ପୁନରୁଦ୍ଧାର: 80% ~ 120%
4. ଲାଇନାରିଟି: 0.0156-0.5pg / μL (forUTP-, pUTP-dsRNA) 0.0312-1pg / μL (forN1-Me-pUTP dsRNA), 0.0625-1pg / μL (5-OMe-UTP-dsRNA ପାଇଁ) |
ବିଚାର
1. ଟିଏମବି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ସମୟ ଗୁରୁତ୍, ପୂର୍ଣ୍ଣ, ଦୟାକରି ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ସେମାନଙ୍କୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |
2. ଭଲ ଆସେ ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତି ଏବଂ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ହାସଲ କରିବାକୁ, ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ ହଟାଇବା ପାଇଁ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକର ସଠିକ୍ ଧୋଇବା ଜରୁରୀ |
3. ସମସ୍ତ ରିଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଉଚିତ୍ ଏବଂ ନମୁନା କିମ୍ବା ରେଜେଣ୍ଟସ୍ ଯୋଗ ସମୟରେ ବମ୍ବେକୁ ଏଡ଼ାଇବା ଉଚିତ୍ |
4. ଯଦି ଏକାଗ୍ର ଧୋଇବା ବଫର୍ (20x) ରେ ସ୍ଫଟିକ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଛି, ତେବେ 37 warm ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଗରମ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ସ୍ଫଟିକଗୁଡିକ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣରୂପେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଧୀରେ ଧୀରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
5. ସୋଡିୟମ୍ ଆଜାଇଡ୍ (NaN3) ଧାରଣ କରିଥିବା ନମୁନାଗୁଡିକର ଅନୁଧ୍ୟାନରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ, କାରଣ ଏହା HRP କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ନଷ୍ଟ କରିପାରେ ଯାହା ଦ୍ d ାରା dsRNA ପରିମାଣର ଅଳ୍ପ ଆକଳନ କରାଯାଇଥାଏ |
6. ଅନୁସନ୍ଧାନ ସମୟରେ RNase ପ୍ରଦୂଷଣରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
7. ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ / ନମୁନା, ଚିହ୍ନଟ ଆଣ୍ଟିବଡି ଏବଂ SA-HRP ମଧ୍ୟ କମ୍ପନ ନକରି RT ରେ କରାଯାଇପାରିବ, କିନ୍ତୁ ଏହା ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ଏକ ଗୁଣ ହ୍ରାସ କରିପାରେ |ଏହି ପରିପ୍ରେକ୍ଷୀରେ, ଆମେ ସୁପାରିଶ କରୁଛୁ ଯେ UTP ଏବଂ pUTP dsRNA ମାନକକୁ 2pg / μL ରୁ ମିଶ୍ରିତ କରାଯିବା ଉଚିତ, N1-Me-pUTP dsRNA ମାନକ 4pg / μL ରୁ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଉଚିତ ଏବଂ 5-OMe-UTP dsRNA ମାନକ 8pg / μL ରୁ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଉଚିତ |ଏହା ସହିତ, ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ 60 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ HRP-streptavidin କାର୍ଯ୍ୟ ସମାଧାନକୁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |ଫ୍ଲାସ୍କ ଶେକର୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ନାହିଁ, କାରଣ ଫ୍ଲାସ୍କ ଶେକର୍ ଭୁଲ୍ ଫଳାଫଳ ଦେଇପାରେ |
ସାଧାରଣ ଫଳାଫଳ |
1. ମାନକ ବକ୍ର ତଥ୍ୟ |
| ଏକାଗ୍ରତା (pg / μl) | N1-Me-pUTP ପରିବର୍ତ୍ତିତ dsRNA ମାନକ | | ||
| OD450-OD650 (1) | OD450-OD650 (2) | ହାରାହାରି | |
| 2 | 2.8412 | 2.7362 | 2.7887 |
| 1 | 1.8725 | 1.9135 | 1.8930 |
| 0.5। 0.5 | 1.0863 | 1.1207 | 1.1035 |
| 0.25 | 0.623 | 0.6055 | 0.6143 |
| 0.125 | 0.3388 | 0.3292 | 0.3340 |
| 0.0625 | 0.1947 | 0.1885 | 0.1916 |
| 0.0312 | 0. 1192 | 0.1247 | 0.1220 |
| 0 | 0.0567 | 0.0518 | 0.0543 |
2. ମାନକ ବକ୍ର ଗଣନା |
3. ଲାଇନ୍ର୍ ଚିହ୍ନଟ ପରିସର: 0.0312- 1pg / μL |
| ଏକାଗ୍ରତା (pg / μl) | OD450-OD650 |
| 1 | 1.8930 |
| 0.5। 0.5 | 1.1035 |
| 0.25 | 0.6143 |
| 0.125 | 0.3340 |
| 0.0625 | 0.1916 |
| 0.0312 | 0.1220 |
