M-MLV ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ |
ଜେନେଟିକ୍ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଦ୍ୱାରା ରେଭସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ପ୍ରାପ୍ତ ହୁଏ |ଏଥିରେ ଅଧିକ ସିଡିଏନ୍ଏ ସିନ୍ଥେସିସ୍ କ୍ଷମତା, ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତାପମାତ୍ରା ସୀମା (60 ° C ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) ଅଛି |ସିନ୍ଥେସାଇଜଡ୍ cDNA ଉତ୍ପାଦ 10 kb ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅଟେ |ଏହା ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକର ସମ୍ବନ୍ଧକୁ ବ ances ାଇଥାଏ ଏବଂ ଜଟିଳ ଦଳୀୟ ସଂରଚନା କିମ୍ବା କମ୍ କପି ଜିନ୍ ସହିତ RNA ଟେମ୍ପଲେଟର ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
| ଉପାଦାନ | | HC2003 ବି-01 (10,000U) | HC2003 ବି-02 (5 * 10,000U) | HC2003 ବି-03 (200,000U) |
| ରେଭସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ (200U / μL) | 50 μL | 5 × 50 μL | | 1 ମି |
| 5 × ରେଭସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ବଫର୍ | | 250 μL | 1.25 ମି | 5 ମି.ଲି. |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ଏହି ଉତ୍ପାଦକୁ 2 ବର୍ଷ ପାଇଁ -25 ° C ~ -15 ° C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯିବା ଉଚିତ |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍ 1 nmol dTTP କୁ ଏସିଡ୍-ଅବିସ୍ମରଣୀୟ ପଦାର୍ଥରେ 10 ମିନିଟରେ 37 ° C ରେ ଅଲିଗୋ (dT) କୁ ପ୍ରାଥମିକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରେ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସେଟଅପ୍ |
1. RNA ଟେମ୍ପଲେଟର ଡେନାଟେରେସନ୍ (ଏହି ପଦକ୍ଷେପଟି ବ al କଳ୍ପିକ, RNA ଟେମ୍ପଲେଟର ଡେନାଟେରେସନ୍ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ସଂରଚନା ଖୋଲିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ, ଯାହା ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ର ଅମଳକୁ ଉନ୍ନତ କରିବ |)
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ (μL) |
| RNase ମାଗଣା ddH |2O | 13 କୁ |
| ଅଲିଗୋ (dT)18 (50 μmol / L) କିମ୍ବା ରାଣ୍ଡମ ପ୍ରାଇମର୍ (50 olmol / L) କିମ୍ବା ଜିନ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଥମିକ (2 olmol / L) | 1 |
| କିମ୍ବା 1 | |
| କିମ୍ବା 1 | |
| RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ | | Xa |
ଟିପ୍ପଣୀ:
1) a: ମୋଟ RNA: 1-5 ug କିମ୍ବା mRNA: 1-500 ng
2) 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 65 ° C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ, ତାପରେ ତୁରନ୍ତ ବରଫକୁ 2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଥଣ୍ଡା କରିବାକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ |ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତରଳ ସଂଗ୍ରହ କରିବାକୁ ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍, ନିମ୍ନ ସାରଣୀରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନ ଯୋଗକର |ମିଶ୍ରଣ ପାଇଁ ଧୀରେ ଧୀରେ ପାଇପେଟ୍ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣର ପ୍ରସ୍ତୁତି (20 μL ଭଲ୍ୟୁମ୍)
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ (μL) |
| ପୂର୍ବ ସୋପାନର ମିଶ୍ରଣ | | 13 |
| 5 × ବଫର୍ | | 4 |
| dNTP ମିଶ୍ରଣ (10nmol / L) | 1 |
| ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ (200 U / μL) | 1 |
| RNase inhibitor (40 U / μL) | 1 |
1.ନିମ୍ନଲିଖିତ ସର୍ତ୍ତରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କର:
| ତାପମାତ୍ରା (° C) | ସମୟ |
| 25 ° Ca | 5 ମିନିଟ୍ |
| 42 ° Cb | 15-30 ମିନିଟ୍ | |
| 85 ° Cc | 5 ମିନିଟ୍ |
ଟିପ୍ପଣୀ:
1) କ।5 ମିନିଟ ପାଇଁ 25 ° C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେସନ କେବଳ ରାଣ୍ଡମ ହେକ୍ସାମର ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ |ଅଲିଗୋ (dT) ବ୍ୟବହାର କରିବାବେଳେ ଦୟାକରି ଏହି ପଦକ୍ଷେପକୁ ଏଡ଼ାଇ ଦିଅନ୍ତୁ |18କିମ୍ବା ଜିନ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ |
2) ଖ।ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଥିବା ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ତାପମାତ୍ରା 42 ° C, ଜଟିଳ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ସଂରଚନା କିମ୍ବା ଉଚ୍ଚ ଜିସି ବିଷୟବସ୍ତୁ ଥିବା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପାଇଁ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତାପମାତ୍ରାକୁ 50-55 ° C କୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
3) ଗ।ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜକୁ ନିଷ୍କ୍ରିୟ କରିବା ପାଇଁ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 85 ° C ରେ ଉତ୍ତାପ |
4) ଉତ୍ପାଦକୁ ସିଧାସଳଖ PCR କିମ୍ବା qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ, କିମ୍ବା ସ୍ୱଳ୍ପ ମିଆଦି ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ -20 ° C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ |ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପାଇଁ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକୁ ସଜାଡ଼ିବା ଏବଂ -80 ° C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
5) ଉତ୍ପାଦଟି ଗୋଟିଏ ପର୍ଯ୍ୟାୟ RT-qPCR ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ, ପ୍ରତ୍ୟେକ 25μL ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପାଇଁ 10-20 U ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପେଟେଜ୍ ଯୋଡିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି, କିମ୍ବା ପ୍ରକୃତ ପରିସ୍ଥିତି ଅନୁଯାୟୀ ଧୀରେ ଧୀରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ପରିମାଣ ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
ଟିପ୍ପଣୀ |
1.ଦୟାକରି ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ କ୍ଷେତ୍ରକୁ ସଫା ରଖନ୍ତୁ;ଅପରେସନ୍ ସମୟରେ ସଫା ଗ୍ଲୋଭସ୍ ଏବଂ ମାସ୍କ ପିନ୍ଧିବା ଉଚିତ୍ |ପରୀକ୍ଷଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ସମସ୍ତ ଉପଯୋଗୀ ସାମଗ୍ରୀ RNase ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ RNase ମୁକ୍ତ ହେବା ଉଚିତ |
2. RNA ଅବକ୍ଷୟକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ବରଫ ଉପରେ ସମସ୍ତ ପ୍ରକ୍ରିୟା କରାଯିବା ଉଚିତ |
3. ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ଉଚ୍ଚ ଦକ୍ଷତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଉଚ୍ଚମାନର RNA ନମୁନାଗୁଡିକ ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |
4. ଏହି ଉତ୍ପାଦ କେବଳ ଅନୁସନ୍ଧାନ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ |
5. ଆପଣଙ୍କର ସୁରକ୍ଷା ପାଇଁ ଦୟାକରି ଲ୍ୟାବ କୋଟ୍ ଏବଂ ଏକ ଥର ବ୍ୟବହାର କରାଯାଉଥିବା ଗ୍ଲୋଭସ୍ ସହିତ କାର୍ଯ୍ୟ କରନ୍ତୁ |
