5 × ନିଓସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ଫାଷ୍ଟ RT-qPCR ପ୍ରେମିକ୍ସ ପ୍ଲସ୍- UNG |
ବିଲେଇ ନଂ: HCB5142A |
ନିଓସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ଫାଷ୍ଟ ଆରଟି ପ୍ରେମିକ୍ସ-ୟୁଏନଜି (ପ୍ରୋବ qRT-PCR) ହେଉଛି ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ସ୍ଥିର ଏକ-ଟ୍ୟୁବ୍ ପ୍ରୋବ-ଆଧାରିତ ମିଶ୍ରଣ ଯାହା ଗୋଟିଏ ପାଦର ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ ପରିମାଣିକ PCR (qRT-PCR) ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |ଏହା ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ପ୍ରୋବଗୁଡିକର ପୂର୍ବ-ମିଶ୍ରଣକୁ ସମର୍ଥନ କରେ ଏବଂ ସ୍ୱଳ୍ପ ତାପମାତ୍ରାରେ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ ସ୍ଥିର ରହେ |ପରୀକ୍ଷଣ ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାକୁ ଅତିରିକ୍ତ ଟ୍ୟୁବ୍ ଖୋଲିବା / ପାଇପେଟିଂ ଅପରେସନ୍ ବିନା ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ ସିଧାସଳଖ ଯୋଗ କରାଯାଇପାରିବ |ଏହି ଉତ୍ପାଦ ଉପାଦାନଗୁଡିକ ଯୋଗାଏ, ଯଥା ହଟ୍-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍, M-MLV, ଉତ୍ତାପ-ଲାବିଲ୍ ୟୁରାସିଲ୍ DNA ଗ୍ଲାଇକୋସାଇଲେସ୍ (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl |2, dNTPs (dTTP ପରିବର୍ତ୍ତେ dUTP ସହିତ), ଏବଂ ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର୍ |ଜେନେଟିକ୍ ରୂପାନ୍ତରିତ ଦ୍ରୁତ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପେଟେଜ୍ ଏବଂ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସହିତ, 20-40 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ କରିବା ସମ୍ଭବ |ଏହି ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଆଣ୍ଟି-ଇନହିବିଟୋରୀ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ ୟୁଏନଜି ଏନଜାଇମର ମିଶ୍ରିତ ଏନଜାଇମ୍ ସହିତ qPCR ପାଇଁ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ବଫର୍ ବ୍ୟବହାର କରେ |ତେଣୁ, ଏହା ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଗୁଡିକର ଭଲ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ହାସଲ କରିପାରିବ ଏବଂ PCR ଅବଶିଷ୍ଟ ଏବଂ ଏରୋସୋଲ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ଦ୍ false ାରା ମିଥ୍ୟା ବିସ୍ତାରକୁ ରୋକିପାରିବ |ଏହି ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଅଧିକାଂଶ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ PCR ଉପକରଣ ସହିତ ଉତ୍ପାଦିତ ବାୟୋ ସିଷ୍ଟମ୍, ଏପେଣ୍ଡୋର୍ଫ, ବାୟୋ-ରେଡ୍ ଏବଂ ରୋଚ୍ ଭଳି ସୁସଙ୍ଗତ |
ଉପାଦାନ |
୧।25 × ନିଓସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ଫାଷ୍ଟ RTase / UNG ମିଶ୍ରଣ |
୨।5 × ନିଓସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ଫାଷ୍ଟ ଆରଟି ପ୍ରେମିକ୍ସ ବଫର୍ (dUTP)
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ସମସ୍ତ ଉପାଦାନଗୁଡିକ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପାଇଁ -20 at ଏବଂ 3 months ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ରଖିବା ଉଚିତ୍ |ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଦୟାକରି ଥୋଇଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ପରେ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
qRT-PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | 25μLସିଷ୍ଟମ୍ | 50μLସିଷ୍ଟମ୍ | ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା | |
5 × ନିଓସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ଫାଷ୍ଟ ଆରଟି ପ୍ରେମିକ୍ସ ବଫର୍ (dUTP) | 5μL | 10μL | 1 × |
25 × ନିଓସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ଫାଷ୍ଟ RTase / UNG ମିଶ୍ରଣ | | 1μL | 2μL | 1 × |
25 × ପ୍ରାଇମର୍-ପ୍ରୋବ ମିକ୍ସ |a | 1μL | 2μL | 1 × |
ଟେମ୍ପଲେଟ୍ RNA |b | - | - | - |
ddH2O | 25μL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | 50μL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | - |
1) ପ୍ରାଇମରର ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ 0.2 0.2μM ଅଟେ |ଉତ୍ତମ ଫଳାଫଳ ପାଇଁ, ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା 0.2-1μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ |ସାଧାରଣତ ,, ଅନୁସନ୍ଧାନର ଏକାଗ୍ରତା 0.1-0.3μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ |
2) ଖ। ଯେତେବେଳେ ଏକ ଦ୍ରୁତ PCR ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ପ୍ରୋବ୍ର ଏକାଗ୍ରତା ବ better ଼ିବା ଦ୍ better ାରା ଉନ୍ନତ ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ଫଳାଫଳ ହୋଇପାରେ ଏବଂ ସେହି ଅନୁପାତରେ ସେହି ଅନୁପାତକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ |
3) ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ନମୁନାରେ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଏବଂ ଇନହିବିଟରର ବିଷୟବସ୍ତୁ ଏବଂ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର କପି ସଂଖ୍ୟା ରହିଥାଏ |ପ୍ରକୃତ ପରିମାଣ ଦ୍ୱାରା ନମୁନା ଭଲ୍ୟୁମକୁ ବିଚାର କରାଯିବା ଉଚିତ |ଯଦି ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ମୁକ୍ତ ଜଳ କିମ୍ବା ଟି ବଫର୍ ସହିତ ନମୁନାର ଏକ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା Conditions
ନିୟମିତ PCR ପ୍ରଣାଳୀ | | ଦ୍ରୁତ PCR ପ୍ରଣାଳୀ | | ||||||
ପ୍ରଣାଳୀ | ଟେମ୍ପ୍ | | ସମୟ | ଚକ୍ର | ପ୍ରଣାଳୀ | ଟେମ୍ପ୍ | | ସମୟ | ଚକ୍ର |
ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ | | 50 ℃ | 10-20 ମିନିଟ୍ | | 1 | ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ | | 50 ℃ | 5 ମିନିଟ୍ | 1 |
ପଲିମେରେଜ୍ | ସକ୍ରିୟକରଣ | 95 ℃ | 1-5 ମିନିଟ୍ | | 1 | ପଲିମେରେଜ୍ | ସକ୍ରିୟକରଣ | 95 ℃ | 30s | 1 |
ଅବନତି | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 | ଅବନତି | 95 ℃ | 1-3s | 40-50 |
ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ | ଏବଂ ସମ୍ପ୍ରସାରଣ | 56-64 ℃ | 20-60s | ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ | ଏବଂ ସମ୍ପ୍ରସାରଣ | 56-64 ℃ | 3-20s |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
1।କାର୍ଯ୍ୟ ଚିହ୍ନଟ: qPCR ର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏବଂ ପୁନରାବୃତ୍ତି |
୨।କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ: କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ଏବଂ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ନାହିଁ |
ଟିପ୍ପଣୀ |
୧।ଦ୍ରୁତ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ର ବୃଦ୍ଧି ହାର 1kb / 10s ରୁ କମ୍ ନୁହେଁ |ବିଭିନ୍ନ PCR ଯନ୍ତ୍ରରେ ଭିନ୍ନ ଗରମ ଏବଂ କୁଲିଂ ଗତି, ତାପମାତ୍ରା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ମୋଡ୍ ଏବଂ ତାପଜ କଣ୍ଡକ୍ଟିଭିଟି ଅଛି, ଏବଂ ଏହିପରି ଆପଣଙ୍କର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଦ୍ରୁତ PCR ଯନ୍ତ୍ର ସହିତ ମିଳିତ ଭାବରେ ଆପଣଙ୍କର ପ୍ରାଇମର୍ / ପ୍ରୋବ ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ ଚାଲିବା ପଦ୍ଧତିର ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ଜରୁରୀ |
୨।ଏହି ଉତ୍ପାଦ ବ୍ୟାପକ ପ୍ରୟୋଗ କରିଥାଏ, ଏବଂ ଏହା ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ମଲିକୁଲାର ନିରାକରଣ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |କମ୍ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଥିବା ପ୍ରାଇମର୍ ପାଇଁ କିମ୍ବା 200 ବିପିରୁ ଅଧିକ ଲମ୍ବା ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ତିନି-ପର୍ଯ୍ୟାୟ PCR ପଦ୍ଧତି ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |
3ଯେହେତୁ ବିଭିନ୍ନ ଆମ୍ପଲିକନ୍ ଗୁଡିକରେ DUTP ର ଭିନ୍ନ ଉପଯୋଗିତା ଦକ୍ଷତା ଏବଂ UNG ପ୍ରତି ଭିନ୍ନ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଅଛି, ଯଦି UNG ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ହ୍ରାସ ହୁଏ ତେବେ ପୁନ ag ଗୁଡିକ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ |ଆବଶ୍ୟକ ହେଲେ ବ technical ଷୟିକ ସହାୟତା ପାଇଁ ଦୟାକରି ଆମ ସହିତ ଯୋଗାଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
4ବହନକାରୀ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକର ବିସ୍ତାରକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ବର୍ଦ୍ଧିତ ପାଇଁ ଉତ୍ସର୍ଗୀକୃତ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ କ୍ଷେତ୍ର ଏବଂ ପାଇପେଟ୍ ଆବଶ୍ୟକ |ଗ୍ଲୋଭସ୍ ସହିତ କାର୍ଯ୍ୟ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବାରମ୍ବାର ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ପରେ PCR ଟ୍ୟୁବ୍ ଖୋଲନ୍ତୁ ନାହିଁ |