Rnase Inhibitor (ଗ୍ଲାଇସେରଲ୍ ମୁକ୍ତ)
ମୁରିନ୍ ଆରଏନ୍ଏସ୍ ଇନହିବିଟର ହେଉଛି ଏକ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର ଯାହା ଇ.କୋଲିରୁ ପ୍ରକାଶିତ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧ ହୋଇଛି |ଏହା ଅଣ-କୋଭାଲାଣ୍ଟ ବନ୍ଧନ ମାଧ୍ୟମରେ 1: 1 ଅନୁପାତରେ RNase A, B କିମ୍ବା C କୁ ବାନ୍ଧେ, ଯାହା ଦ୍ the ାରା ତିନୋଟି ଏନଜାଇମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ କରେ ଏବଂ RNA କୁ ଅବକ୍ଷୟରୁ ରକ୍ଷା କରେ |ତଥାପି, ଏହା Aspergillus ରୁ RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H କିମ୍ବା RNase ବିପକ୍ଷରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ନୁହେଁ |ମୁରାଇନ୍ ଆରଏନ୍ଏସ୍ ଇନହିବିଟର RT-PCR, RT-qPCR ଏବଂ IVT mRNA ଦ୍ tested ାରା ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ବ୍ୟବସାୟିକ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେସ୍, DNA ପଲିମେରାସ୍ ଏବଂ RNA ପଲିମେରାସ୍ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ ଥିଲା |
ମାନବ RNase ଇନହିବିଟର ତୁଳନାରେ, ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟରରେ ଦୁଇଟି ସିଷ୍ଟାଇନ୍ ଥାଏ ନାହିଁ ଯାହା ଅକ୍ସିଡେସନ୍ ପ୍ରତି ଅତ୍ୟଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଅଟେ ଯାହା ଇନହିବିଟରର ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ |ଏହାକୁ DTT ର କମ୍ ଏକାଗ୍ରତାରେ ସ୍ଥିର କରିବା (1 ମିଟରରୁ କମ୍) |ଏହି ବ feature ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଏହାକୁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ କରିଥାଏ ଯେଉଁଠାରେ DTT ର ଅଧିକ ଏକାଗ୍ରତା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ପ୍ରତିକୂଳ ଅଟେ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ RT-PCR) |
Aନିବେଦନ
ଏହି ଉତ୍ପାଦକୁ ଯେକ any ଣସି ପରୀକ୍ଷଣରେ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ ଯେଉଁଠାରେ RNA ଅବକ୍ଷୟକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ RNase ହସ୍ତକ୍ଷେପ ସମ୍ଭବ, ଯେପରିକି:
1. ପ୍ରଥମ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍, RT-PCR, RT-qPCR, ଇତ୍ୟାଦି;
2. ଇନ୍-ଭିଟ୍ରୋ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ / ଅନୁବାଦରେ ଅବନତିରୁ RNA ରକ୍ଷା କରନ୍ତୁ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ ଭିଟ୍ରୋରେ ଭାଇରାଲ୍ ନକଲ);
3. RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ସମୟରେ RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ପ୍ରତିବନ୍ଧକ |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
-25 ～ -15 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ କରନ୍ତୁ;
ଫ୍ରିଜ୍-ଥ୍ ଚକ୍ର ≤ 5 ଥର;
1 ବର୍ଷ ପାଇଁ ବ id ଧ |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍ RNase A ର 5 ng ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ 50% ରୋକିବା ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ RNase Inhibitor ର ପରିମାଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି |
ମଲିକୁଲାର ଓଜନ |
RNase Inhibitor (ଗ୍ଲାଇସେରୋଲ ମୁକ୍ତ) ହେଉଛି 50 kDa ପ୍ରୋଟିନ୍ |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
Exonuclease କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:
40 μ U ଏନଜାଇମର ଇନକ୍ୟୁବେସନ 1 μg λ- ହିନ୍ଦ III ହଜମ DNA କୁ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 37 ° C ରେ ପରିଣତ କଲା ଯାହା ଦ୍ gel ାରା ଜେଲ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ଡିଏନ୍ଏର କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ହୋଇନପାରେ।
ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:
37 ° C ରେ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 1 μg λ DNA ସହିତ 40 U ଏନଜାଇମର ଇନକ୍ୟୁବେସନ, ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିବା DNA ର କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ହୋଇନପାରେ |
ନିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:
37 μ ରେ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 1 μg pBR322 ସହିତ 40 U ର ଏନଜାଇମ୍ ର ଇନକ୍ୟୁବେସନ, ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିବା DNA ର କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ହୋଇନପାରେ |
RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:
37 U ରେ 4 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 1.6 μg MS2 RNA ସହିତ 40 U ଏନଜାଇମ୍ ର ଇନକ୍ୟୁବେସନ, ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିବା RNA ର କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ହୋଇନପାରେ |
E.coli DNA:
TaqMan qPCR ଦ୍ୱାରା 40 U ଏନଜାଇମ୍ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଛି |E.coli DNA ହେଉଛି ≤ 0. 1pg / 40U |
Notes
1. ଏନଜାଇମ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟତାକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ଜୋରରେ ହଲାନ୍ତୁ ନାହିଁ କିମ୍ବା ଘାଣ୍ଟନ୍ତୁ ନାହିଁ |
2.RNase inhibitor 25 ℃ ରୁ 55 temperatures ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ତାପମାତ୍ରାରେ ସକ୍ରିୟ ଏବଂ ≥65 at ରେ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ଅଟେ |
3. RNase H, RNase 1, ଏବଂ RNase T1 ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ନୁହେଁ |
4. RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିବା ପାଇଁ pH ପରିସର ପ୍ରଶସ୍ତ (pH 5-9 ରେ ସକ୍ରିୟ), pH 7-8 ରେ ସର୍ବାଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ |
