Bst 2.0 DNA ପଲିମେରେଜ୍ (ଗ୍ଲାଇସେରଲ୍ ମୁକ୍ତ)
Bst DNA polymerase V2 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I ରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ, ଯାହାର 5 ′ → 3 ′ DNA ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଶୃଙ୍ଖଳା ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି, କିନ୍ତୁ 5 ′ → 3 ′ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ |Bst DNA Polymerase V2 ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ-ବିସ୍ଥାପନ, ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ LAMP (ଲୁପ୍ ମଧ୍ୟସ୍ଥ ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍) ଏବଂ ଦ୍ରୁତ କ୍ରମ ପାଇଁ ଆଦର୍ଶ ଉପଯୁକ୍ତ |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
| ଉପାଦାନ | | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (ଗ୍ଲାଇସେରୋଲ ମୁକ୍ତ) (8U / μL) | 0.2 ମି | 1 ମି | 10 ମି |
| 10 × HC Bst V2 ବଫର୍ | | 1.5 ମି.ଲି. | 2 × 1.5 ମି | 3 × 10 ମି |
| MgSO4(100 ମି) | 1.5 ମି.ଲି. | 2 × 1.5 ମି | 2 × 10 ମି |
ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ
1. ଲ୍ୟାମ୍ପ ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ |
2. ଡିଏନ୍ଏ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ସିଙ୍ଗଲ୍ ବିସ୍ଥାପନ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା |
3. ଉଚ୍ଚ ଜିସି ଜିନ୍ କ୍ରମ |
4. ନାନୋଗ୍ରାମ୍ ସ୍ତରର DNA କ୍ରମ |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
0 ° C ତଳେ ପରିବହନ ଏବଂ -25 ° C ~ -15 ° C ରେ ଗଚ୍ଛିତ |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍କୁ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି ଯାହାକି 25 nmol dNTP କୁ 30 ମିନିଟରେ 65 ° C ରେ ଏସିଡ୍ ଦ୍ରବୀଭୂତ ପଦାର୍ଥରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରିଥାଏ |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
1.ପ୍ରୋଟିନ୍ ଶୁଦ୍ଧତା ଅନୁଧ୍ୟାନ (SDS-PAGE):କୁମାସି ବ୍ଲୁ ଚିହ୍ନଟ ବ୍ୟବହାର କରି SDS-PAGE ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ B ାରା Bst DNA ପଲିମେରେଜ୍ V2 ର ଶୁଦ୍ଧତା ≥99% ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ |
2.Exonuclease କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |:50 μL ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଇନକ୍ୟୁବେସନରେ ସର୍ବନିମ୍ନ 8 U Bst DNA ପଲିମେରେଜ୍ V2 ସହିତ 1 μg λ -Hind Ⅲ ହଜମ DNA 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 37 at ରେ ହଜମ ହୁଏ ℃ ଫଳାଫଳ ଅନୁଯାୟୀ କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବକ୍ଷୟ ହୁଏ ନାହିଁ |
3.ନିକେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |:50 μL ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସର୍ବନିମ୍ନ 8 U Bst DNA ପଲିମେରେଜ୍ V2 ସହିତ 1 μg pBR322 DNA ସହିତ 16 ° 37 ° C ରେ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବନତି ଘଟାଏ ନାହିଁ |
4.RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |:50 μL ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ସର୍ବନିମ୍ନ 8 U Bst DNA ପଲିମେରେଜ୍ V2 ଧାରଣ କରି 1.6 μg MS2 RNA ସହିତ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 37 ° C ରେ କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବକ୍ଷୟ ହୁଏ ନାହିଁ |
5.E. coli DNA:120 U ର Bst DNA ପଲିମେରେଜ୍ V2, E. coli 16S rRNA ଲୋକସ୍ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ସହିତ TaqMan qPCR ବ୍ୟବହାର କରି ଇ କୋଲି ଜେନୋମିକ୍ DNA ର ଉପସ୍ଥିତି ପାଇଁ ସ୍କ୍ରିନ କରାଯାଏ |E. coli genomic DNA ପ୍ରଦୂଷଣ ହେଉଛି ≤1 କପି |
LAMP ପ୍ରତିକ୍ରିୟା |
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 ବଫର୍ | | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 ମି) | 1.5 μL |
| dNTPs (ପ୍ରତ୍ୟେକ 10mM) | 3.5 μL |
| SYTO ™ 16 ସବୁଜ (25 ×)a | 1.0 μL |
| ପ୍ରାଥମିକ ମିଶ୍ରଣ |b | 6 μL |
| Bst DNA ପଲିମେରେଜ୍ V2 (ଗ୍ଲାଇସେରଲ୍ ମୁକ୍ତ) (8 U / uL) | 1 μL |
| ଟେମ୍ପଲେଟ୍ | | × μL |
| ddH₂O | 25 μL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |
ଟିପ୍ପଣୀ:
1) କ।SYTOTM 16 ସବୁଜ (25 ×): ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଆବଶ୍ୟକତା ଅନୁଯାୟୀ, ଅନ୍ୟ ରଙ୍ଗଗୁଡିକ ବିକଳ୍ପ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରେ;
2) ଖ।ପ୍ରାଥମିକ ମିଶ୍ରଣ: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ମିଶ୍ରଣ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରାପ୍ତ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ ଅବସ୍ଥା |
1 × HC Bst V2 ବଫର୍, ଇନକ୍ୟୁବେସନ ତାପମାତ୍ରା 60 ° C ରୁ 65 ° C ମଧ୍ୟରେ |
ଉତ୍ତାପ ନିଷ୍କ୍ରିୟତା |
80 ° C ， 20 ମିନିଟ୍ |
