ହଟଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ |
ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ (ଆଣ୍ଟିବଡି ମୋଡିଫିକେସନ୍) ହେଉଛି ଥର୍ମସ୍ ଆକ୍ୱାଟିକସ୍ YT-1 from ରୁ ଏକ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଥର୍ମୋଷ୍ଟେବଲ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଯାହା 5 ′ → 3 ′ ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ 5´ ଫ୍ଲାପ୍ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଧାରଣ କରିଥାଏ |ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ହେଉଛି ଏକ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ଯାହା ଥର୍ମୋଲାବାଇଲ ଟ୍ୟାକ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି ଦ୍ୱାରା ପରିବର୍ତ୍ତିତ |ଆଣ୍ଟିବଡି ସଂଶୋଧନ PCR ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା, ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ଅମଳ ବୃଦ୍ଧି କଲା |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
| ଉପାଦାନ | | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5 × HC Taq ବଫର୍ | | 4 × 1 ମି | 4 × 10 ମି | 4 × 50 mL | 5 × 400 ମି |
| ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍ (ଆଣ୍ଟିବଡି ସଂଶୋଧିତ) (5 U / μL) | 0.1 ମି.ଲି. | 1 ମି | 5 ମି.ଲି. | 10 × 5 mL |
ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ
10 ମିଟର ଟ୍ରାଇସ୍-ଏଚ୍.ସି.
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
0 ° C ତଳେ ପରିବହନ ଏବଂ -25 ° C ~ -15 ° C ରେ ଗଚ୍ଛିତ |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍କୁ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି ଯାହାକି 15 nmol dNTP କୁ ଏସିଡ୍ ଦ୍ରବୀଭୂତ ପଦାର୍ଥରେ 30 ମିନିଟରେ 75 ° C ରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
1.Endକାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:37 μ ରେ 4 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 4 μg pUC19 DNA ସହିତ 20 U ଏନଜାଇମର ଇନକ୍ୟୁବେସନ, ଜେଲ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିବା DNA ର କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବକ୍ଷୟ ହୋଇନଥିଲା |
2.5 kb ଲମ୍ବଡା PCR:200 ngM dNTP ଏବଂ 0.2 µM ପ୍ରାଇମର୍ ଉପସ୍ଥିତିରେ 1.25 ୟୁନିଟ୍ ଟ୍ୟାକ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସହିତ 5 ng ଲମ୍ବଡା DNA ର PCR ବର୍ଦ୍ଧନର 25 ଚକ୍ର ଆଶା କରାଯାଉଥିବା 5 kb ଉତ୍ପାଦରେ ଫଳାଫଳ ଦିଏ |
3.Exonuclease କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |:37 µ ରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 10 nmol 5´-FAM ଅଲିଗ୍ନୁକ୍ଲାଏଟାଇଡ୍ ସହିତ ସର୍ବନିମ୍ନ 12.5 U Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା 50 µl ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଇନକ୍ୟୁବେସନ କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବକ୍ଷୟ କରେ ନାହିଁ |
4.RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |:37 µ C ରେ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 1 μg RNA ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସହିତ 20 U ଏନଜାଇମ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା 10 µL ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଇନକ୍ୟୁବେସନ, ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିବା RNA ର କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଅବକ୍ଷୟ ହୋଇନଥିଲା |
5.ଉତ୍ତାପ ନିଷ୍କ୍ରିୟତା:ନା।
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମ୍ |
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ |
| ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA |a | ବ al କଳ୍ପିକ |
| 10 μM ଅଗ୍ରଗାମୀ ପ୍ରାଇମର୍ | | 0.5 μL |
| 10 μM ଓଲଟା ପ୍ରାଇମର୍ | | 0.5 μL |
| dNTP ମିଶ୍ରଣ (ପ୍ରତ୍ୟେକ 10mM) | 0.5 μL |
| 5 × HC Taq ବଫର୍ | | 5 μL |
| Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ |ଖ(5U / μL) | 0.125 μL |
| ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ମୁକ୍ତ ଜଳ | | 25 μL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |
ଟିପ୍ପଣୀ:
1) କ।
| DNA | | ପରିମାଣ |
| ଜେନୋମିକ୍ | | 1 ng-1 μg |
| ପ୍ଲାଜାମିଡ୍ କିମ୍ବା ଭାଇରାଲ୍ | | 1 pg-1 ng |
2) ଖ।ବିଶେଷ ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକରେ Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଏକାଗ୍ରତା 5-50 ୟୁନିଟ୍ / mL (0.1-0.5 ୟୁନିଟ୍ / 25 µL ପ୍ରତିକ୍ରିୟା) ରୁ ହୋଇପାରେ |
ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲିଂ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ |
PCR
| ପଦାଙ୍କ | ତାପମାତ୍ରା(° C) | ସମୟ | ଚକ୍ରଗୁଡିକ |
| ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ବିଭାଜନa | 95 ℃ | 1-3 ମିନିଟ୍ | - |
| ଅବନତି | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 ଚକ୍ର | |
| ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ |ଖ | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| ସମ୍ପ୍ରସାରଣ | 68 ℃ | 1kb / ମିନିଟ୍ | |
| ଅନ୍ତିମ ବିସ୍ତାର | 68 ℃ | 5 ମିନିଟ୍ | - |
ଟିପ୍ପଣୀ:
1) 95 ° C ରେ 1 ମିନିଟର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଅବନତି ଅଧିକାଂଶ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଯଥେଷ୍ଟ |କଠିନ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ ପାଇଁ, 95 ° C ରେ 2-3mins ର ଲମ୍ବା ଡେନାଟେସନ୍ ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |କଲୋନୀ PCR ସହିତ, 95 ° C ରେ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ 5 ମିନିଟ୍ ଡେନାଟରେସନ୍ ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |
2) ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ସାଧାରଣତ 15 15-60 s ଅଟେ |ଆନିଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ପ୍ରାଥମିକ ଯୁଗଳର Tm ଉପରେ ଆଧାରିତ ଏବଂ ସାଧାରଣତ 45 45-68 is ଅଟେ |
