ଏଣ୍ଡୋ ଫ୍ରି ପ୍ଲାସିମ ମ୍ୟାକ୍ସି କିଟ୍ |
ଏହି କିଟ୍ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆକୁ ଲାଇସ୍ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଉନ୍ନତ SDS- କ୍ଷାରୀୟ ଲାଇସିସ୍ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ରାତାରାତି ସଂସ୍କୃତ 150 - 300 ମିଲି ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଦ୍ରବଣରୁ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |ଅଶୋଧିତ ନିର୍ବାହ ଏକ ଅନନ୍ୟ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ସ୍କାଭେଞ୍ଜର୍ ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇ ଏଣ୍ଡୋଟୋକିନ୍ସ ଅପସାରଣ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ପୃଥକ |ତାପରେ, ସିଲିକା ଜେଲ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଉଚ୍ଚ-ଲୁଣ ଏବଂ କମ୍- pH ଅବସ୍ଥାରେ ସମାଧାନରେ ପ୍ଲାସିମ DNA ସହିତ ବାନ୍ଧେ |ଅପରିଷ୍କାରତା ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜୀବାଣୁ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକୁ ହଟାଇବା ପାଇଁ ୱାଶ୍ ବଫର୍ ଯୋଗକରି ଏହା ଅନୁସରଣ କରାଯାଏ |ଶେଷରେ, ସିଲିକନ୍ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ମେମ୍ବ୍ରାନରୁ ଶୁଦ୍ଧ ପ୍ଲାସିମ DNA କୁ ବ ute ାଇବା ପାଇଁ ଏକ ସ୍ୱଳ୍ପ ଲୁଣ, ଉଚ୍ଚ- pH ଏଲିଟେସନ୍ ବଫର୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ସିଲିକା ଜେଲ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଆଡସର୍ପସନ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ନିୟୋଜିତ କରେ, ଏବଂ ସ୍ତମ୍ଭ ଏବଂ ସ୍ତମ୍ଭ ମଧ୍ୟରେ ଆଡସର୍ପସନ୍ ପରିମାଣର ପାର୍ଥକ୍ୟ ବହୁତ ଛୋଟ ଏବଂ ପୁନରାବୃତ୍ତି ଭଲ |ଫେନୋଲ, କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ବିଷାକ୍ତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆବଶ୍ୟକ ନାହିଁ, ଏବଂ ଇଥାନଲ ବୃଷ୍ଟିପାତ ପଦକ୍ଷେପ ମଧ୍ୟ ନୁହେଁ |ଏହି କିଟ୍ ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ 0.2 -1.5 ମିଗ୍ରା ଶୁଦ୍ଧ ହାଇ-କପି ପ୍ଲାସିମ DNA ବାହାର କରିବାରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହାର ଉତ୍ତୋଳନ ହାର 80% -90% ଅଟେ |କିଟ୍ ଏକ ଅନନ୍ୟ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସୂତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରେ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ଅପସାରଣ କରେ, ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ର ବିଷୟବସ୍ତୁ ଅତ୍ୟନ୍ତ କମ୍ ଏବଂ କୋଷର ସଂକ୍ରମଣ ପ୍ରଭାବ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ଅଟେ |ବାହାର କରାଯାଇଥିବା ପ୍ଲାସିମିଡ୍ ସିଧାସଳଖ ଏନଜାଇମ୍ ହଜମ, PCR, ଭିଟ୍ରୋ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍, ଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ମେସନ୍, କ୍ରମ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ମଲିକୁଲାର ବାୟୋଲୋଜି ପରୀକ୍ଷଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରେ |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
RNaseA -30 ~ -15 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ ଏବଂ ≤0 at ରେ ପରିବହନ କରାଯିବା ଉଚିତ |
ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ସ୍କାଭେଞ୍ଜରକୁ ଏକ ମାସ ପାଇଁ 2 ~ 8 at ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ, ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ -30 ~ -15 at ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ |ଏବଂ ≤0 at ରେ ପରିବହନ କରାଯାଇଥିଲା |
ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଉପାଦାନଗୁଡିକ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ (15 ~ 25 ℃) ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ ଏବଂ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ପରିବହନ କରାଯିବା ଉଚିତ |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | 10RXNS |
| RNase A। | 750 μL |
| ବଫର୍ P1 | | 75 ମି.ଲି. |
| ବଫର୍ P2 | | 75 ମି.ଲି. |
| ବଫର୍ P4 | | 75 ମି.ଲି. |
| ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ସ୍କାଭେଞ୍ଜର୍ | | 25 ମି.ଲି. |
| ବଫର୍ PW | | 2 × 22 ମି.ଲି. |
| ବଫର୍ ଟିବି | | 20 ମି.ଲି. |
| ଫାଷ୍ଟପ୍ୟୁର୍ ଡିଏନ୍ଏ ମ୍ୟାକ୍ସି ସ୍ତମ୍ଭ (ପ୍ରତ୍ୟେକ 50ml କଲେକ୍ସନ୍ ଟ୍ୟୁବରେ) | 10 |
| ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ମୁକ୍ତ ସଂଗ୍ରହ ଟ୍ୟୁବ୍ | | 2 × 5 |
RNaseA:10 ମିଗ୍ରା / ମିଲି, RNA ଅପସାରଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ |
ବଫର୍ P1:ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ସସପେନ୍ସନ୍ ବଫର୍, ପ୍ରଥମ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ବଫର୍ P1 ରେ RNaseA ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
ବଫର୍ P2:ଜୀବାଣୁ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ (SDS / NaOH ଧାରଣ କରିଥାଏ) |
ବଫର୍ P4:ବଫରକୁ ନିରପେକ୍ଷ କରିବା |
ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ସ୍କାଭେଞ୍ଜର୍:ଅଶୋଧିତ ପ୍ଲାସିମ ନିର୍ବାହରୁ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନକୁ ଫଳପ୍ରଦ ଭାବରେ ବାହାର କରନ୍ତୁ |
ବଫର୍ PW:ବଫର୍ ଧୋଇଦିଅ, ପ୍ରଥମ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଇଥାନଲ୍ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପରିମାଣକୁ ଯୋଗ କର |
ବଫର୍ ଟିବି:ଏଲିଟେସନ୍ ବଫର୍ |
ଫାଷ୍ଟପୁର DNA ମ୍ୟାକ୍ସି ସ୍ତମ୍ଭ:ପ୍ଲାଜାମିଡ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଆଡସୋର୍ସେସନ୍ ସ୍ତମ୍ଭ |
ସଂଗ୍ରହ ଟ୍ୟୁବ୍ 50 ମିଲି:ଫିଲ୍ଟରେଟ୍ ସଂଗ୍ରହ ଟ୍ୟୁବ୍ |
ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ମୁକ୍ତ ସଂଗ୍ରହ ଟ୍ୟୁବ୍:ପ୍ଲାସିମ DNA ସଂଗ୍ରହ ଟ୍ୟୁବ୍ |
ପ୍ରସ୍ତୁତ ସାମଗ୍ରୀ |
ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଇଥାନଲ, ଆଇସୋପ୍ରୋପାନୋଲ, 50 ମିଲି ରାଉଣ୍ଡ-ତଳ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ 50 ମିଲି ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ମୁକ୍ତ |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ |
ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ
ଏହି ଉତ୍ପାଦ 150 ରୁ 300 ମିଲି ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଦ୍ରବଣରୁ ପ୍ଲାସିମିଡ୍ର ବୃହତ ଆକାରର ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |ରାତାରାତି ସଂସ୍କୃତ |
ପରୀକ୍ଷଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା |
1. ରାତାରାତି ସଂସ୍କୃତ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଦ୍ରବଣର 150 - 200 ମିଲି (300 ମିଲିରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ) ନିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ |1 - 2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ପ୍ରାୟ 11,000 rpm (12,000 × g) |ଅଲ ern କିକ ତ୍ୟାଗ କରି ଜୀବାଣୁ ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତୁ |
50 ମିଲିରୁ ଅଧିକ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ସମାଧାନ ସଂଗ୍ରହ କରିବା ସମୟରେ, ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ସମାଧାନ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍, ଅଲ ern କିକ ତ୍ୟାଗ ଏବଂ ସମାନ 50 ମିଲି ଟ୍ୟୁବରେ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପଦକ୍ଷେପ ମିଶାଇ ଜୀବାଣୁ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇପାରିବ |
ଏକାଧିକ ଥର |
2. ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗରେ 7.5 ମିଲି ବଫର୍ P1 ଯୋଗ କରନ୍ତୁ (ଦୟାକରି ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ ଯେ RNaseA ବଫର୍ P1 ରେ ଯୋଡି ହୋଇଛି କି ନାହିଁ) |ଜୀବାଣୁ ଧାରଣ କରିଥିବା ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ଭର୍ଟେକ୍ସ କିମ୍ବା ପାଇପେଟିଂ ଦ୍ୱାରା ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
Step ଏହି ପଦକ୍ଷେପରେ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆର ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପୁନର୍ଗଠନ ଅମଳ ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ is ପୂର୍ଣ ଅଟେ, ଏବଂ ପୁନ us ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ କ bacter ଣସି ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ump ୁଲା ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |ଯଦି ସେଠାରେ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ କ୍ଲମ୍ପ ଅଛି ଯାହା ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇନଥାଏ, ଏହା ଲାଇସିସ୍ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବ, ଫଳସ୍ୱରୂପ କମ୍ ଅମଳ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା |ଯଦି ଜୀବାଣୁ ସମାଧାନର OD600 0.65 ଥାଏ, ତେବେ 150 ମିଲି ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଦ୍ରବଣରୁ ବାହାର କରିବା ସମୟରେ 7.5 ମିଲି ବଫର୍ P1 ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି;ଯେତେବେଳେ OD600 ହେଉଛି 0.75, 8 ମିଲି ବଫର୍ P1 ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ବଫର୍ P2 ଏବଂ P4 ର ଭଲ୍ୟୁମ୍ ସେହି ଅନୁଯାୟୀ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯିବା ଉଚିତ |ଯଦି ଜୀବାଣୁ ଦ୍ରବଣର ପରିମାଣ 200 ମିଲି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବୃଦ୍ଧି ହୁଏ, ତେବେ ଏହା ପରାମର୍ଶିତ |ବଫର୍ସ P1, P2, ଏବଂ P4 ର ଆନୁପାତିକ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ହେବ |
3. ଷ୍ଟେପ୍ 2 ରୁ ଜୀବାଣୁ ନିଲମ୍ବନରେ 7.5 ମିଲି ବଫର୍ P2 ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ 6 - 8 ପାଇଁ ଧୀରେ ଧୀରେ ଉପର ଏବଂ ତଳ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |ସମୟ ଏବଂ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ 4 - 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରଣ କରିବାକୁ ଧୀରେ ଧୀରେ ଓଲଟା କରନ୍ତୁ |ଭର୍ଟେକ୍ସିଙ୍ଗ୍ ଜେନୋମିକ୍ DNA ଖଣ୍ଡ ବିଖଣ୍ଡିତ କରିବ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ବାହାର କରାଯାଇଥିବା ପ୍ଲାସିମ୍ରେ ଜେନୋମିକ୍ DNA ଖଣ୍ଡ |ଏହି ସମୟରେ, ସମାଧାନ ଭିଜୁଆ ଏବଂ ସ୍ୱଚ୍ଛ ହୋଇଯାଏ, ଯାହା ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଜୀବାଣୁ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଲାଇସେଡ୍ ହୋଇଛି |ପ୍ଲାସିମଗୁଡିକର ବିନାଶକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ଅବଧି 5 ମିନିଟରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |ଯଦି ସମାଧାନ ସ୍ପଷ୍ଟ ନହୁଏ, ତେବେ ସେଠାରେ ବହୁତ ଜୀବାଣୁ ଥାଇପାରେ |ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଲାଇସିସ୍, ତେଣୁ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆର ପରିମାଣ ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ ହ୍ରାସ ହେବା ଉଚିତ |
4. ଷ୍ଟେପ୍ 3 ରୁ ଜୀବାଣୁ ନିଲମ୍ବନରେ 7.5 ମିଲି ବଫର୍ P4 ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ତୁରନ୍ତ ବଫର୍ P2 କୁ ନିରପେକ୍ଷ କରିବାକୁ ସମାଧାନକୁ ଅନୁମତି ଦେବା ପାଇଁ ତୁରନ୍ତ 6 - 8 ଥର ଧୀରେ ଧୀରେ ଓଲଟା କରନ୍ତୁ |ଏହି ସମୟରେ, ଧଳା ଫ୍ଲକ୍କୁଲେଣ୍ଟ୍ ବର୍ଷା ଦେଖାଯିବା ଉଚିତ |10 - 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ପ୍ରାୟ 11,000 rpm (12,000 × g) ରୁ ଅଧିକ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍, ଅଲ ern କିକ ତତ୍ତ୍ୱକୁ ଏକ ନୂତନ 50 ମିଲି ରାଉଣ୍ଡ-ତଳ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ (ସ୍ୱ-ପ୍ରସ୍ତୁତ) ରେ ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ଏଡାନ୍ତୁ |ଭାସମାନ ଧଳା ବୃଷ୍ଟିପାତକୁ ଆଶାକର |
Buff ବଫର୍ P4 ଯୋଡନ୍ତୁ ଏବଂ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରଣ କରିବାକୁ ତୁରନ୍ତ ଓଲଟା କରନ୍ତୁ |ସ୍ଥାନୀୟ ବୃଷ୍ଟିପାତର ଉତ୍ପାଦନକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ଧଳା ବୃଷ୍ଟିପାତ ସମଗ୍ର ସମାଧାନରେ ସମାନ ଭାବରେ ବଣ୍ଟନ ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଟ୍ୟୁବ୍କୁ ଛିଡା ହେବାକୁ ଛାଡିଦିଅନ୍ତୁ ଯାହା ନିରପେକ୍ଷତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇପାରେ |ଯଦି ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ପୂର୍ବରୁ ଯଦି କ un ଣସି ୟୁନିଫର୍ମ ଧଳା ଫ୍ଲକ୍କୁଲେଣ୍ଟ୍ ବର୍ଷା ନଥାଏ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ପରେ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି ସ୍ପଷ୍ଟ ହୋଇନଥାଏ, ତେବେ ଟ୍ୟୁବ୍ ହୋଇପାରେ |ଅନ୍ୟ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ |
5. ଷ୍ଟେପ୍ 4 ରୁ ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥରେ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ସ୍କାଭେଞ୍ଜରର ଭଲ୍ୟୁମ୍ (10% ଅଲ ern କିକ ଭଲ୍ୟୁମର 10%, ପ୍ରାୟ 2.2 ମିଲି) ଯୋଗ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ମିଶ୍ରଣ ପାଇଁ ଓଲଟା କରନ୍ତୁ |ସମାଧାନକୁ ଏକ ବରଫ ସ୍ନାନରେ ରଖନ୍ତୁ କିମ୍ବା ଚୂର୍ଣ୍ଣ ବରଫରେ (କିମ୍ବା ରେଫ୍ରିଜରେଟର ଫ୍ରିଜରେ) 5 ମିନିଟ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଭର୍ତ୍ତି କରନ୍ତୁ ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସମାଧାନ ଟର୍ବିଡରୁ ସ୍ୱଚ୍ଛ ଏବଂ ସ୍ୱଚ୍ଛ ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ (କିମ୍ବା ତଥାପି)ସାମାନ୍ୟ ଟର୍ବିଡ୍), ଏବଂ ବେଳେବେଳେ ଅନେକ ଥର ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |
End ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ସ୍କାଭେଞ୍ଜର୍ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି ସହିତ ଯୋଡି ହେବା ପରେ, ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି ଟର୍ବିଡ୍ ହୋଇଯିବ କିନ୍ତୁବରଫ ସ୍ନାନରେ ଥଣ୍ଡା ହେବା ପରେ ଅଲ ern କିକତା ସ୍ପଷ୍ଟ ହେବା ଉଚିତ୍ (କିମ୍ବା ସାମାନ୍ୟ ଟର୍ବିଡ୍) |
6. ଅଲ ern କିକ ତତ୍ତ୍ୱକୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ (> 25 ℃) 10-15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରଖାଯିବା ପରେ, ଏହା ଅଶାନ୍ତ ହୋଇଯିବ |ଏହାର ତାପମାତ୍ରା କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥାଏ |ତା’ପରେ ସୁପର୍ନାଣ୍ଟ ମିଶ୍ରଣ ପାଇଁ ଓଲଟା ହେବା ଉଚିତ୍ |
Room ଯଦି କୋଠରୀର ତାପମାତ୍ରା କମ୍ ଥାଏ କିମ୍ବା ଆପଣ ନିଷ୍କାସନ ସମୟ ହ୍ରାସ କରିବାକୁ ଚାହାଁନ୍ତି, ତେବେ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି 5 ~ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 37 ~ 42 ℃ ଜଳ ସ୍ନାନରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପଦକ୍ଷେପ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି ପରେ କରାଯାଇପାରିବ |ଅସ୍ଥିର ହୋଇଯାଏ |
7. ପର୍ଯ୍ୟାୟକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ପ୍ରାୟ 11,000 rpm (12,000 × g) ରେ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତିକୁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କରନ୍ତୁ |ଉପର ଜଳୀୟ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଡିଏନ୍ଏ ଥିବାବେଳେ ନିମ୍ନ ନୀଳ ତେଲିଆ ଚରଣ ସ୍ତରରେ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅପରିଷ୍କାରତା ଥାଏ |ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁଏକ ନୂତନ ଟ୍ୟୁବ୍ ପାଇଁ DNA ଧାରଣ କରିଥିବା ଜଳୀୟ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଏବଂ |ତେଲିଆ ସ୍ତରକୁ ପରିତ୍ୟାଗ କରନ୍ତୁ |
Cent ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ସମୟରେ ତାପମାତ୍ରା 25 ରୁ ଅଧିକ ହେବା ଜରୁରୀ ଯେହେତୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପୃଥକତା ନଥାଏ |ଯଦି ତାପମାତ୍ରା ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍ ହୁଏ |
Δ ଯଦି ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପୃଥକତା ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ନୁହେଁ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ତାପମାତ୍ରା 30 to ଏବଂ ଆଡଜଷ୍ଟ ହୋଇପାରିବ |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ସମୟ 15 ମିନିଟ୍ କୁ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରେ |
Blue ନୀଳ ତେଲିଆ ସ୍ତରକୁ ଚୋବାନ୍ତୁ ନାହିଁ କାରଣ ଏଥିରେ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅପରିଷ୍କାରତା ଥାଏ |
ଯାନ୍ତ୍ରିକତା
ପୁନର୍ଗଠନ ଲାଇସିସ୍ ନିରପେକ୍ଷତା |
7.5 ମିଲି ବଫର୍ P1 ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
7.5 ମିଲି ବଫର୍ P2 ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
7.5 ମିଲି ବଫର୍ P4 ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ଅପସାରଣ |
End ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ସ୍କାଭେଞ୍ଜରର ଅଲ ern କିକ ଭଲ୍ୟୁମ୍ 1 ଗୁଣ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
ବାନ୍ଧିବା ଏବଂ ଧୋଇବା |
Is ଆଇସୋପ୍ରୋପାନୋଲର ଭଲ୍ୟୁମର 0.5 ଗୁଣ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
10 10 ମିଲି ବଫର୍ PW ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
10 10 ମିଲି ବଫର୍ PW ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
ବିଲୋପ
1 - 2 ମିଲି ବଫର୍ ଟିବି କିମ୍ବା ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ମୁକ୍ତ ddH2O ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
