ରୋବଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ |
ରୋବଷ୍ଟାର୍ଟ ଟାକ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ହେଉଛି ଏକ ହଟ ଷ୍ଟାର୍ଟ DNA ପଲିମେରେଜ୍ |ଏହି ଉତ୍ପାଦ କେବଳ PCR ସିଷ୍ଟମ ପ୍ରସ୍ତୁତି ଏବଂ ବିସ୍ତାର ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ପ୍ରାଇମର୍ କିମ୍ବା ପ୍ରାଇମର୍ ଏଗ୍ରିଗେସନ୍ ର ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ଭଲ ଭାବରେ ପ୍ରତିରୋଧ କରିପାରିବ ନାହିଁ |ତେଣୁ, ଏହାର ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଅଛି ଏବଂ ନିମ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକର ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଏହା ଅଧିକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ, ଏବଂ ଏହା ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସଡ୍ PCR ବିସ୍ତାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |ଅଧିକନ୍ତୁ, ଏହି ଉତ୍ପାଦର ବହୁତ ଭଲ ପ୍ରୟୋଗତା ଅଛି, ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ସ୍ଥିର ବିସ୍ତାର ଫଳାଫଳ ମିଳିପାରିବ |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
1.5 U / μL ରୋବଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍ |
2.10 × PCR ବଫର୍ II (Mg² + ମାଗଣା) (ବ al କଳ୍ପିକ)
3.25 ମିମି MgCl |2(ବ al କଳ୍ପିକ)
* 10 × PCR ବଫର୍ II (Mg² + ମାଗଣା) dNTP ଏବଂ Mg² + ଧାରଣ କରେ ନାହିଁ, ଦୟାକରି dNTP ଏବଂ MgCl ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |2ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବାବେଳେ |
ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଥିବା ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ |
1.ଦ୍ରୁତ ବୃଦ୍ଧି
2.ଏକାଧିକ ବୃଦ୍ଧି
3.ରକ୍ତ, ସ୍ ab ାବ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ସିଧାସଳଖ ବୃଦ୍ଧି |
4.ଶ୍ ir ାସକ୍ରିୟା ରୋଗ ଚିହ୍ନଟ |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ -20 ° C, ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଉଚିତ, ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
* ଯଦି ଫ୍ରିଜ୍ ପରେ ବର୍ଷା ହୁଏ, ଏହା ସ୍ୱାଭାବିକ;ମିଶ୍ରଣ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ସନ୍ତୁଳନ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
ଗୋଟିଏ ସକ୍ରିୟ ୟୁନିଟ୍ (U) କୁ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି ଯାହା 10 nmol deoxyribonucleotide କୁ ଏସିଡ୍-ଇନ୍ସୋଲବଲ୍ ପଦାର୍ଥରେ 74 ° C ରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସକ୍ରିୟ ସଲମାନ ଶୁକ୍ରାଣୁ DNA କୁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ / ପ୍ରାଇମର୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
1.SDS-PAGE ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେଟିକ୍ ଶୁଦ୍ଧତା 98% ରୁ ଅଧିକ |
2.ବିସ୍ତାର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ବ୍ୟାଚ୍-ଟୁ-ବ୍ୟାଚ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ସ୍ଥିରତା |
3.କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ, କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କିମ୍ବା ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ନାହିଁ |
ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସେଟଅପ୍ |
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ (μL) | ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା | |
| 10 × PCR ବଫର୍ II (Mg² + ମାଗଣା)a | 5 | 1 × |
| dNTPs (ପ୍ରତ୍ୟେକ dNTP 10mM) | 1 | 200 μM |
| 25 ମିମି MgCl |2 | 2-8 | 1-4 ମି |
| ରୋବଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ (5U / μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × ପ୍ରାଥମିକ ମିଶ୍ରଣ |ଖ | 2 | 1 × |
| ଟେମ୍ପଲେଟ୍ | | - | ＜ 1 μg / ପ୍ରତିକ୍ରିୟା | |
| ddH2O | 50 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | - |
ଟିପ୍ପଣୀ:
1) କ।ବଫର୍ରେ dNTP ଏବଂ Mg² + ନାହିଁ, ଦୟାକରି dNTP ଏବଂ MgCl ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |2ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବାବେଳେ |
2) ଖ।ଯଦି qPCR / qRT-PCR ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବଗୁଡିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମରେ ଯୋଡାଯିବା ଉଚିତ |ସାଧାରଣତ ,, 0.2 μM ର ଏକ ଅନ୍ତିମ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ଭଲ ଫଳାଫଳ ଦେବ;ଯଦି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଖରାପ, ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା 0.2-1 μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ସଜାଡି ହୋଇପାରେ |ଅନୁସନ୍ଧାନର ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ 0.1 0.1-0.3 μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥାଏ |ପ୍ରାଥମିକ ଏବଂ ଅନୁସନ୍ଧାନର ସର୍ବୋତ୍ତମ ମିଶ୍ରଣ ଖୋଜିବା ପାଇଁ ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକ କରାଯାଇପାରିବ |
ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲିଂ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ |
| ନିୟମିତ PCR |ପ୍ରକ୍ରିୟା | |||
| ପଦାଙ୍କ | ତାପମାତ୍ରା | ସମୟ | ଚକ୍ରଗୁଡିକ |
| ପୂର୍ବ-ବିଭାଜନ | | 95 ℃ | 1-5 ମିନିଟ୍ | | 1 |
| ଅବନତି | 95 ℃ | 10-20 ସେକେଣ୍ଡ୍ | 40-50 |
| ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ / ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ | | 56-64 ℃ | 20-60 ସେକେଣ୍ଡ୍ | |
| ଦ୍ରୁତ PCRପ୍ରକ୍ରିୟା | |||
| ପଦାଙ୍କ | ତାପମାତ୍ରା | ସମୟ | ଚକ୍ରଗୁଡିକ |
| ପୂର୍ବ-ବିଭାଜନ | | 95 ℃ | 30 ସେକେଣ୍ଡ୍ | 1 |
| ଅବନତି | 95 ℃ | 1-5 ସେକେଣ୍ଡ | 40-45 |
| ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ / ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ | | 56-64 ℃ | 5-20 ସେକେଣ୍ଡ୍ | |
ଟିପ୍ପଣୀ |
1.ଦ୍ରୁତ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ର ବିସ୍ତାର ହାର 1 kb / 10 s ରୁ କମ୍ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ପତନ ହାର, ତାପମାତ୍ରା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ମୋଡ୍ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ PCR ଯନ୍ତ୍ରର ଉତ୍ତାପ ପରିଚାଳନା ଦକ୍ଷତା ବହୁତ ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ, ତେଣୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଦ୍ରୁତ PCR ଯନ୍ତ୍ର ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥାକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
2.ଉଚ୍ଚ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏବଂ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ସହିତ ସିଷ୍ଟମ୍ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଅନୁକୂଳ ଅଟେ |
3.ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ PCR ଚିହ୍ନଟ ରେଜେଣ୍ଟସ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ, ଏବଂ ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ PCR ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
4.5 ′ → 3 ′ ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ, 5 ′ → 3 ′ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ;no 3 ′ → 5 ′ exonuclease କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ;କ proof ଣସି ପ୍ରୁଫ୍ରେଡିଂ ଫଙ୍କସନ୍ ନାହିଁ |
5.PCR ଏବଂ RT-PCR ର ଗୁଣାତ୍ମକ ଏବଂ ପରିମାଣିକ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |
6.PCR ଉତ୍ପାଦର 3 ′ ଶେଷ ହେଉଛି A, ଯାହାକୁ ସିଧାସଳଖ ଏକ T ଭେକ୍ଟରରେ କ୍ଲୋନ କରାଯାଇପାରିବ |
7.ନିମ୍ନ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଥିବା ପ୍ରାଇମର୍ ପାଇଁ କିମ୍ବା 200 ବିପିରୁ ଅଧିକ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ତିନି-ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପଦ୍ଧତି ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |
