ପ୍ରୋଟିନେଜ୍ K mNGS (ତରଳ)
ବିସ୍ତୃତ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ସହିତ ପ୍ରୋଟିନ୍ କେ ହେଉଛି ଏକ ସ୍ଥିର ସେରିନ୍ ପ୍ରୋଟିସ୍ |ଡିଟରଜେଣ୍ଟଙ୍କ ଉପସ୍ଥିତିରେ ମଧ୍ୟ ଏହା ଦେଶୀ ରାଜ୍ୟରେ ଅନେକ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଖରାପ କରିଥାଏ |ସ୍ଫଟିକ୍ ଏବଂ ମଲିକୁଲାର୍ ଗଠନ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ପ୍ରମାଣ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଏକ ସକ୍ରିୟ ସାଇଟ୍ କାଟାଲାଇଟିସ୍ ଟ୍ରାଇଡ୍ (ଆସ୍ପ) ସହିତ ଏନଜାଇମ୍ ସବଟିଲିସିନ୍ ପରିବାରର ଅଟେ |39-ସେ69-ସେର୍224)କ୍ଲିଭେଜ୍ ର ମୁଖ୍ୟ ସ୍ଥାନ ହେଉଛି ଅବରୋଧିତ ଆଲଫା ଆମିନୋ ଗ୍ରୁପ୍ ସହିତ ଆଲିଫାଟିକ୍ ଏବଂ ସୁଗନ୍ଧିତ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ର କାର୍ବକ୍ସିଲ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ସହିତ ଥିବା ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ବଣ୍ଡ |ଏହା ସାଧାରଣତ its ଏହାର ବ୍ୟାପକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଏହି ପ୍ରୋଟିନେସ୍ କେ ସ୍ m ତନ୍ତ୍ର ଭାବରେ mNGS ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଛି |ଅନ୍ୟ ପ୍ରୋଟିନେଜ୍ କେ ତୁଳନାରେ, ଏଥିରେ ସମାନ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ସହିତ କମ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ରହିଥାଏ, ଯାହା ଡାଉନ୍ଷ୍ଟ୍ରିମ୍ mNGS ପ୍ରୟୋଗକୁ ଭଲ ଭାବରେ ନିଶ୍ଚିତ କରିପାରିବ |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
2-8 2 2 ବର୍ଷ ପାଇଁ |
ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟକରଣ
| ଦୃଶ୍ୟ | ରଙ୍ଗହୀନ ହାଲୁକା ବାଦାମୀ ତରଳ | |
| କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ | ≥800 U / ml |
| ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏକାଗ୍ରତା | | ≥20 ମିଗ୍ରା / ମି.ଲି. |
| ନିକେଜ୍ | | କେହି ଚିହ୍ନଟ ହେଲେ ନାହିଁ | |
| DNase | କେହି ଚିହ୍ନଟ ହେଲେ ନାହିଁ | |
| RNase | କେହି ଚିହ୍ନଟ ହେଲେ ନାହିଁ | |
ଗୁଣଧର୍ମ
| EC ସଂଖ୍ୟା | 3.4.21.64(Tritirachium ଆଲବମରୁ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ) |
| ଇସୋଲେକ୍ଟ୍ରିକ୍ ପଏଣ୍ଟ | | 7.81 |
| ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ pH | 7.0- 12.0 ଚିତ୍ର 1 |
| ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା | | 65 ℃ ଚିତ୍ର 2 |
| pH ସ୍ଥିରତା | | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 ଘ) ଚିତ୍ର 3 | |
| ତାପଜ ସ୍ଥିରତା | | 50 ତଳେ (pH 8.0, 30 ମିନିଟ୍) ଚିତ୍ର 4 | |
| ସଂରକ୍ଷଣ ସ୍ଥିରତା | | 25 at ରେ 12 ମାସ ପାଇଁ 90% ରୁ ଅଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ | |
| ସକ୍ରିୟକାରୀ | SDS, ୟୁରିଆ |
| ପ୍ରତିବନ୍ଧକ | | ଡାଇସୋପ୍ରୋପିଲ୍ ଫ୍ଲୋରୋଫୋସଫେଟ୍;ଫେନିଲମେଥାଇଲସୁଲଫୋନିଲ ଫ୍ଲୋରାଇଡ୍ | |
ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ
1. ଜେନେଟିକ୍ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ କିଟ୍ |
2. RNA ଏବଂ DNA ନିଷ୍କାସନ କିଟ୍ |
3. ଟିସୁରୁ ଅଣ-ପ୍ରୋଟିନ୍ ଉପାଦାନଗୁଡିକ ବାହାର କରିବା, ପ୍ରୋଟିନ୍ ଅପରିଷ୍କାରର ଅବକ୍ଷୟ, ଯେପରିକି DNA |ଟିକା ଏବଂ ହେପାରିନ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି |
4. ପଲ୍ସଡ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ୱାରା କ୍ରୋମୋଜୋମ୍ DNA ର ପ୍ରସ୍ତୁତି |
5. ପାଶ୍ଚାତ୍ୟ ବ୍ଲଟ୍ |
6. ଭିଟ୍ରୋ ନିରାକରଣରେ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଗ୍ଲାଇକୋସାଇଲେଟେଡ୍ ଆଲବମିନ ରିଜେଣ୍ଟସ୍ |
ସତର୍କତା |
ବ୍ୟବହାର କିମ୍ବା ଓଜନ କରିବା ସମୟରେ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଗ୍ଲୋଭସ୍ ଏବଂ ଗଗଲ୍ ପିନ୍ଧନ୍ତୁ, ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପରେ ଭଲ ଚାଳିତ ରଖନ୍ତୁ |ଏହି ଦ୍ରବ୍ୟ ଚର୍ମର ଆଲର୍ଜି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ ଆଖିରେ ଗମ୍ଭୀର ଉତ୍ତେଜନା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ |ଯଦି ନିଶ୍ୱାସ ପ୍ରଶ୍ୱାସ ନିଆଯାଏ, ତେବେ ଏହା ଆଲର୍ଜି କିମ୍ବା ଆଜମା ଲକ୍ଷଣ କିମ୍ବା ଡିସପ୍ନିଆର କାରଣ ହୋଇପାରେ |ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟାରେ ଉତ୍ତେଜନା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍ (U) 1 μmol ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ କେସିନ୍ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି |ନିମ୍ନଲିଖିତ ଅବସ୍ଥାରେ ପ୍ରତି ମିନିଟରେ ଟାଇରୋସିନ୍ |
ପୁନ ag ପ୍ରସ୍ତୁତି |
Reagent I: 1g ଦୁଗ୍ଧ କେସିନ୍ 50 ମି.ଲି 0.1 ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ଦ୍ରବଣ (pH 8.0) ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହୋଇଥିଲା, 65-70 ℃ ପାଣିରେ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନ୍କ୍ୟୁବ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଉତ୍ତେଜିତ ଏବଂ ଦ୍ରବୀଭୂତ, ଜଳ ଦ୍ୱାରା ଥଣ୍ଡା, ସୋଡିୟମ୍ ହାଇଡ୍ରକ୍ସାଇଡ୍ ଦ୍ୱାରା pH 8.0 ରେ ସ୍ଥିର, ଏବଂ ସ୍ଥିର ପରିମାଣ | 100ml
Reagent II: 0.1M ଟ୍ରାଇକ୍ଲୋରୋଏସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍, 0.2 ମି ସୋଡିୟମ୍ ଆସେଟେଟ୍, 0.3 ମି ଏସିଟିକ୍ ଏସିଡ୍ |
Reagent III: 0.4M Na2CO3ସମାଧାନ
Reagent IV: Forint reagent ଶୁଦ୍ଧ ପାଣିରେ 5 ଥର ମିଶ୍ରିତ |
ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଭି: ଏନଜାଇମ୍ ହଳଦିଆ: 0.1 ମି ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ସମାଧାନ (pH 8.0) |
Reagent VI: ଟାଇରୋସିନ୍ ସମାଧାନ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol / ml ଟାଇରୋସିନ୍ 0.2 ସହିତ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହେଲା |M HCl
ପ୍ରଣାଳୀ
1. m.m ମି.ଲି. ରିଜେଣ୍ଟ୍ ମୁଁ 37 pre କୁ ପୂର୍ବରୁ ଗରମ କରେ, 0.5ml ଏନଜାଇମ୍ ଦ୍ରବଣ ମିଶାନ୍ତୁ, ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ, ଏବଂ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 37 ℃ |
2. ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ବନ୍ଦ କରିବା, ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରଣ କରିବା ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ଜାରି ରଖିବା ପାଇଁ 1ml reagent II ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
3. ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେଟ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନ |
4. m। M ମି.ଲି ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥ ନିଅନ୍ତୁ, m। M ମି.ଲି.30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ |
5. OD660OD ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |1;ଖାଲି କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ଗ୍ରୁପ୍: ଏନଜାଇମ୍ ବଦଳାଇବା ପାଇଁ m। m ମିଲି ରିଜେଣ୍ଟ V ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |OD ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ସମାଧାନ |660OD ଭାବରେ |2, ΔOD = OD1-OD2.
6. ଏଲ୍-ଟାଇରୋସିନ୍ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର: m.m ମି.ଲି.660L-tyrosine ର ବିଭିନ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା ପାଇଁ, ତାପରେ ମାନକ ବକ୍ର Y = kX + b ପ୍ରାପ୍ତ ହେଲା, ଯେଉଁଠାରେ Y ହେଉଛି L-tyrosine ଏକାଗ୍ରତା, X ହେଉଛି OD |600.
ଗଣନା
2: ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନର ମୋଟ ପରିମାଣ (mL)
0.5। :: ଏନଜାଇମ୍ ସମାଧାନର ପରିମାଣ (mL)
0.5: କ୍ରୋମୋଜେନିକ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ (mL) ରେ ବ୍ୟବହୃତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତରଳ ପରିମାଣ |
10: ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟ (ମିନିଟ୍)
Df: ମିଶ୍ରଣ ଏକାଧିକ |
C: ଏନଜାଇମ୍ ଏକାଗ୍ରତା (mg / mL)
ସନ୍ଦର୍ଭ
1. ୱାଇଗର୍ ୟୁ ଏବଂ ହିଲଜ୍ H. FEBS ଲେଟ |(1972);23:77
2. ୱାଇଗର୍ ୟୁ ଏବଂ ହିଲଜ୍ ଏଚ୍ ବାୟୋକେମ୍ |ବାୟୋଫିସ୍ |Res।ଯୋଗାଯୋଗ |(1971);44: 513
3. ହିଲଜ୍, ଏଚ୍et al।,ୟୁର।ଜେ ବାୟୋକେମ୍ |(1975);56: 103-108
4. ସାମ୍ବ୍ରୋକ୍ ଜେet al।, ମଲିକୁଲାର କ୍ଲୋନିଂ: ଏକ ଲାବୋରେଟୋରୀ ମାନୁଆଲ୍, ୨ୟ ସଂସ୍କରଣ, କୋଲ୍ଡ ସ୍ପ୍ରିଙ୍ଗ ହାରବର୍ |ଲାବୋରେଟୋରୀ ପ୍ରେସ୍, କୋଲ୍ଡ ସ୍ପ୍ରିଙ୍ଗ ହାରବର୍ (1989) |
ସଂଖ୍ୟା
ଡ଼ିମ୍.1 ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ pH
100 ମିମି ବଫର୍ ସମାଧାନ: pH6.0-8.0, ନା-ଫସଫେଟ୍;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, ଗ୍ଲାଇସିନ୍- NaOH। ଏନଜାଇମ୍ ଏକାଗ୍ରତା: 1mg / mL |
ଚିତ୍ର 2 ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା |
20 ମିଟର କେ-ଫସଫେଟ୍ ବଫର୍ pH 8.0 ରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା |ଏନଜାଇମର ଏକାଗ୍ରତା: 1 ମିଗ୍ରା / ମି
ଚିତ୍ର 3 pH ସ୍ଥିରତା |
25 ℃, 50 ମିଟର ବଫର୍ ସମାଧାନ ସହିତ 16 ଘଣ୍ଟା ଚିକିତ୍ସା: pH 4.5- 5.5, ଆସେଟେଟ୍;pH 6.0-8.0, ନା-ଫସଫେଟ୍;pH 8.0-9.0, ଟ୍ରାଇସ୍-HClpH 9.0- 12.5, ଗ୍ଲାଇସିନ୍- NaOH |ଏନଜାଇମର ଏକାଗ୍ରତା: 1 ମିଗ୍ରା / ମି
ଚିତ୍ର 4 ତାପଜ ସ୍ଥିରତା
50 ମିଟର ଟ୍ରାଇସ୍- HCl ବଫର୍, pH 8.0 ସହିତ 30 ମିନିଟ୍ ଚିକିତ୍ସା |ଏନଜାଇମର ଏକାଗ୍ରତା: 1 ମିଗ୍ରା / ମି
ଚିତ୍ର 5 ସଂରକ୍ଷଣ ଷ୍ଟାବିଲି |ty at 25 ℃
