ତାପମାତ୍ରା ସମ୍ବେଦନଶୀଳ UNG |
ଇ କୋଲିରେ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଦ୍ୱାରା ତାପମାତ୍ରା ସମ୍ବେଦନଶୀଳ UNG (TS-UNG) ପ୍ରାପ୍ତ |ଏନଜାଇମ୍ ୟୁରାସିଲ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକକ ଏବଂ ଦ୍ୱିଗୁଣିତ DNA ରୁ ମାଗଣା ୟୁରାସିଲ୍ ରିଲିଜ୍କୁ ଅନୁକରଣ କରିଥାଏ ଏବଂ RNA ବିରୁଦ୍ଧରେ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ଅଟେ |ଇ କୋଲି ଜିନ୍ ଉତ୍ପାଦନର ପାରମ୍ପାରିକ UNG ଏନଜାଇମ୍ ତୁଳନାରେ, TS-UNG ଏନଜାଇମର ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ ଅଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି (20 ℃ ~ 37 ℃) ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଏବଂ ସହଜରେ ନିଷ୍କ୍ରିୟ (50 ℃), DUTP ଧାରଣକାରୀ ବିସ୍ତାରର ଅବକ୍ଷୟକୁ ଏଡାଇଥାଏ | ଅବଶିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦ୍ room ାରା କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଉତ୍ପାଦ ଯାହା ପାରମ୍ପାରିକ UNG ଏନଜାଇମ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହେବା ପରେ ରହିପାରେ |ତେଣୁ, TS-UNG ଏନଜାଇମ୍ କେବଳ PCR ପ୍ରଦୂଷଣ ରୋକିବା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ନୁହେଁ, ବରଂ RT-PCR ବିସ୍ତାରଣ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ସହିତ ମଧ୍ୟ ମେଳ ଖାଉଛି ଏବଂ RT-PCR ପ୍ରଦୂଷଣ ପ୍ରତିରୋଧ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଥିବା ଆବେଦନ |
ପ୍ରଦୂଷଣ ରୋକିବା ବୃଦ୍ଧି
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ -20 ° C, ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଉଚିତ, ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ବଫର୍ |
20 ମିଟର ଟ୍ରାଇସ୍- HCl (pH 7.5), 100 MM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର୍, 50% ଗ୍ଲାଇସେରଲ୍ |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
37 ° C ରେ 1 ଘଣ୍ଟାରେ dU ବେସ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା 1µg ସିଙ୍ଗଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA କୁ ଡିଗ୍ରେଡ୍ କରିବା ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ହେଉଛି 1 ୟୁନିଟ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ (U) |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
1.SDS-PAGE ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେଟିକ୍ ଶୁଦ୍ଧତା 98% ରୁ ଅଧିକ |
2.ଡିଗ୍ରେଡେସନ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ, ବ୍ୟାଚ୍-ଟୁ-ବ୍ୟାଚ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ସ୍ଥିରତା |
3.କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ, କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କିମ୍ବା ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ନାହିଁ |
ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ (μL) | ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା | |
| 10 × PCR ବଫର୍ (dNTP ମୁକ୍ତ, Mg² |+ମାଗଣା) | 5 | 1 × |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP କୁ ବଦଳାନ୍ତୁ) | - | 200-600 μM |
| 25 ମିମି MgCl |2 | 2-8 μL | 1-4 ମି |
| 5 U / μL Taq | | 0.25 | 1.25 U। |
| 1 U / μLTS-UNG | | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × ପ୍ରାଥମିକ ମିଶ୍ରଣ |a | 2 | 1 × |
| ଟେମ୍ପଲେଟ୍ | | - | Μ 1μg / ପ୍ରତିକ୍ରିୟା |
| ddH₂O | 50 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | - |
ଟିପନ୍ତୁ: a: ଯଦି qPCR / qRT-PCR ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବକୁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମରେ ଯୋଡାଯିବା ଉଚିତ |ସାଧାରଣତ ,, 0.2.μ μM ର ଏକ ଅନ୍ତିମ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ଭଲ ଫଳାଫଳ ଦେଇପାରେ |ଯେତେବେଳେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଖରାପ ହୁଏ, ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା 0.2-1 μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ସଜାଡି ହୋଇପାରେ |ସାଧାରଣତ ,, ଅନୁସନ୍ଧାନର ଏକାଗ୍ରତା 0.1-0.3 μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୁଏ |ପ୍ରାଥମିକ ଏବଂ ଅନୁସନ୍ଧାନର ସର୍ବୋତ୍ତମ ମିଶ୍ରଣ ଖୋଜିବା ପାଇଁ ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକ କରାଯାଇପାରିବ |
ଟିପ୍ପଣୀ |
1.TS-UNG ଏନଜାଇମର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତାପମାତ୍ରା ଅପେକ୍ଷାକୃତ କମ୍, ଏବଂ ଏହା 20 ℃ ~ 37 range ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ, ଏନଜାଇମର ମାତ୍ରା ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟ 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ | 10 ମିନିଟ୍;ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଏନଜାଇମ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇପାରେ |
2.ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ଏହା PCR ଏବଂ RT-PCR ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |
3.ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ, ଏବଂ ବଡ଼ ତାପମାତ୍ରାର ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ପ୍ରକାଶ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |
4.ବର୍ଦ୍ଧିତ ହେବାକୁ ଥିବା ବିଭିନ୍ନ ଜିନ୍ ଗୁଡିକରେ DUTP ର ବିଭିନ୍ନ ବ୍ୟବହାର ଦକ୍ଷତା ଏବଂ UNG ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଅଛି, ତେଣୁ, ଯଦି UNG ସିଷ୍ଟମର ବ୍ୟବହାର ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ହ୍ରାସ କରେ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀକୁ ସଜାଡିବା ଏବଂ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ, ଯଦି ଆପଣ ବ technical ଷୟିକ ସହାୟତା ଆବଶ୍ୟକ କରନ୍ତି, ଦୟାକରି ଯୋଗାଯୋଗ କରନ୍ତୁ | ଆମର କମ୍ପାନୀ
