ୟୁନିଭର୍ସାଲ୍ SYBR ଗ୍ରୀନ୍ qPCR ପ୍ରେମିକ୍ସ (ନୀଳ)
ବିଲେଇ ନଂ: HCB5041B |
ୟୁନିଭର୍ସାଲ୍ ବ୍ଲୁ qPCR ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସ (ରଙ୍ଗ ଆଧାରିତ) ହେଉଛି 2 × ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ପରିମାଣିକ PCR ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଏକ ପୂର୍ବ-ସମାଧାନ, ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ, ନୀଳ ରଙ୍ଗରେ, ଏବଂ ନମୁନା ଯୋଗ ଅନୁସନ୍ଧାନର ପ୍ରଭାବ ଅଛି |ମୂଳ ଉପାଦାନ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି ସମୟରେ ପ୍ରାଇମର୍ ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ହେତୁ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ପ୍ରତିରୋଧ କରିବା ପାଇଁ ଆଣ୍ଟିବଡି ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରେ |ସେହି ସମୟରେ, ସୂତ୍ର PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ଜିସି ବିଷୟବସ୍ତୁ (30 ~ 70%) ସହିତ ଜିନ୍ ର ବିସ୍ତାରକୁ ସମାନ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରୋତ୍ସାହନ କାରକ ଯୋଗ କରିଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ quant ାରା ପରିମାଣିକ PCR ଏକ ବ୍ୟାପକ ପରିମାଣରେ ଏକ ଭଲ ର ar ଖ୍ୟ ସମ୍ପର୍କ ହାସଲ କରିପାରିବ | ଅଞ୍ଚଳଏହି ଉତ୍ପାଦରେ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ROX ପାସିଭ୍ ରେଫରେନ୍ସ ରଙ୍ଗ ଥାଏ, ଯାହା ଅଧିକାଂଶ qPCR ଉପକରଣ ପାଇଁ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ |ବିଭିନ୍ନ ଯନ୍ତ୍ରରେ ROX ର ଏକାଗ୍ରତାକୁ ସଜାଡିବା ଆବଶ୍ୟକ ନୁହେଁ |ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ କେବଳ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଯୋଡିବା ଆବଶ୍ୟକ |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
ୟୁନିଭର୍ସାଲ୍ ବ୍ଲୁ qPCR ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସ |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ଉତ୍ପାଦଟି ବରଫ ପ୍ୟାକ୍ ସହିତ ପଠାଯାଏ ଏବଂ 18 ମାସ ପାଇଁ -25 ℃ ~ -15 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ |ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ଗଚ୍ଛିତ କିମ୍ବା ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ସମୟରେ ଦୃ strong ଆଲୋକ ବିକିରଣରୁ ଦୂରେଇ ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ |
ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟକରଣ
ଏକାଗ୍ରତା | | 2 × |
ଚିହ୍ନଟ ପଦ୍ଧତି | | SYBR |
PCR ପଦ୍ଧତି | | qPCR |
ପଲିମେରେଜ୍ | | Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ | |
ନମୁନା ପ୍ରକାର | | DNA | |
ପ୍ରୟୋଗ ଉପକରଣ | ଅଧିକାଂଶ qPCR ଯନ୍ତ୍ରଗୁଡ଼ିକ | |
ଉତ୍ପାଦ ପ୍ରକାର | | ବାସ୍ତବ ସମୟ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ PCR ପାଇଁ SYBR ପ୍ରିମିକ୍ସ | |
(ଆବେଦନ) ରେ ଆବେଦନ କରନ୍ତୁ | | ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ | |
ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ
1. ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମ୍ |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ (μL)) | ଭଲ୍ୟୁମ୍ (μL)) | ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା | |
ୟୁନିଭର୍ସାଲ୍ SYBR ଗ୍ରୀନ୍ qPCR ପ୍ରେମିକ୍ସ | | 25 | 10 | 1 × |
ଅଗ୍ରଗାମୀ ପ୍ରାଇମର୍ (10μmol / L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol / L |
ଓଲଟା ପ୍ରାଇମର୍ (10μmol / L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol / L |
DNA | | X | X | |
ddH2O | 50 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | 20 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | - |
[ଦ୍ରଷ୍ଟବ୍ୟ]: ଜୋରରେ କମ୍ପନରୁ ଅତ୍ୟଧିକ ବୁବୁଲକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
କ) ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା: ଅନ୍ତିମ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ହେଉଛି 0.2μmol / L, ଏବଂ ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ 0.1 ରୁ 1.0μmol / L ମଧ୍ୟରେ ମଧ୍ୟ ସଜାଡିହେବ |
ଖ) ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏକାଗ୍ରତା: ଯଦି ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଅନାବଶ୍ୟକ cDNA ଷ୍ଟକ୍ ସମାଧାନ ଅଟେ, ବ୍ୟବହୃତ ଭଲ୍ୟୁମ୍ qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ସମୁଦାୟ ଭଲ୍ୟୁମର 1/10 ରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |
ଗ) ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଦିଲ୍ୟୁସନ୍: cDNA ଷ୍ଟକ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ କୁ 5-10 ଥର ହ୍ରାସ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଯୋଡାଯାଇଥିବା ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ ପରିମାଣ ଭଲ, ଯେତେବେଳେ ବୃଦ୍ଧି ଦ୍ୱାରା ପ୍ରାପ୍ତ Ct ମୂଲ୍ୟ 20-30 ଚକ୍ର ଅଟେ |
ଘ) ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ: ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ବିସ୍ତାରର କାର୍ଯ୍ୟକାରିତା ଏବଂ ପୁନରାବୃତ୍ତି ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ 20μL କିମ୍ବା 50μL ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
ଇ) ସିଷ୍ଟମ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି: ଦୟାକରି ସୁପର କ୍ଲିନ୍ ବେଞ୍ଚରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହୁଅନ୍ତୁ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ଅବଶିଷ୍ଟ ବିନା ଟିପ୍ସ ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ଫିଲ୍ଟର କାର୍ଟ୍ରିଜ୍ ସହିତ ଟିପ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |କ୍ରସ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ଏବଂ ଏରୋସୋଲ୍ ପ୍ରଦୂଷଣରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
2।ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ |
ମାନକ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ |
ଚକ୍ର ପଦକ୍ଷେପ | ଟେମ୍ପ୍ | | ସମୟ | ଚକ୍ରଗୁଡିକ |
ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ବିଭାଜନ | 95 ℃ | 2 ମିନିଟ୍ | 1 |
ଅବନତି | 95 ℃ | 10 ସେକେଣ୍ଡ୍ | 40 |
ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ / ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ | | 60 ℃ | 30 ସେକେଣ୍ଡ ★ | |
ତରଳିବା ବକ୍ର ପର୍ଯ୍ୟାୟ | | ସାଧନ ଡିଫଲ୍ଟ | | 1 |
ଦ୍ରୁତ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ |
ଚକ୍ର ପଦକ୍ଷେପ | ଟେମ୍ପ୍ | | ସମୟ | ଚକ୍ରଗୁଡିକ |
ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ବିଭାଜନ | 95 ℃ | 30 ସେକେଣ୍ଡ୍ | 1 |
ଅବନତି | 95 ℃ | 3 ସେକେଣ୍ଡ୍ | 40 |
ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ / ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ | | 60 ℃ | 20 ସେକେଣ୍ଡ ★ | |
ତରଳିବା ବକ୍ର ପର୍ଯ୍ୟାୟ | | ସାଧନ ଡିଫଲ୍ଟ | | 1 |
[ଦ୍ରଷ୍ଟବ୍ୟ]: ଦ୍ରୁତ ପ୍ରୋଗ୍ରାମଟି ଅଧିକାଂଶ ଜିନ୍ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ, ଏବଂ ମାନକ ପ୍ରୋଗ୍ରାମଗୁଡିକ ବ୍ୟକ୍ତିଗତ ଜଟିଳ ଦଳୀୟ ସଂରଚନା ଜିନ୍ ପାଇଁ ଚେଷ୍ଟା କରାଯାଇପାରେ |
କ) ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ସମୟ: ଦୟାକରି ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ଅନୁଯାୟୀ ଆଡଜଷ୍ଟ କରନ୍ତୁ |
ଖ) ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗନାଲ୍ ଅଧିଗ୍ରହଣ (★): ଯନ୍ତ୍ରର ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀରେ ଆବଶ୍ୟକତା ଅନୁଯାୟୀ ଦୟାକରି ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରଣାଳୀ ସେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
ଗ) ତରଳିବା ବକ୍ର: ଯନ୍ତ୍ରର ଡିଫଲ୍ଟ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ ସାଧାରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରେ |
3. ଫଳାଫଳ ବିଶ୍ଳେଷଣ |
ପରିମାଣିକ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ତିନୋଟି ଜ ological ବିକ ପ୍ରତିକୃତି ଆବଶ୍ୟକ |ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରେ, ବିସ୍ତାରଣ ବକ୍ର ଏବଂ ତରଳିବା ବକ୍ର ନିଶ୍ଚିତ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |
3.1 ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ର:
ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ର ହେଉଛି S- ଆକୃତି |Ct ମୂଲ୍ୟ 20 ରୁ 30 ମଧ୍ୟରେ ପଡିବାବେଳେ ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ସବୁଠାରୁ ସଠିକ୍ ଅଟେ | ଯଦି Ct ମୂଲ୍ୟ 10 ରୁ କମ୍ ଥାଏ, ତେବେ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ କୁ ହ୍ରାସ କରିବା ଏବଂ ପୁନର୍ବାର ପରୀକ୍ଷା କରିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଯେତେବେଳେ Ct ମୂଲ୍ୟ 30-35 ମଧ୍ୟରେ ଥାଏ, ସେତେବେଳେ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏକାଗ୍ରତା କିମ୍ବା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର ପରିମାଣ ବ to ାଇବା ଆବଶ୍ୟକ, ଯାହା ଦ୍ the ାରା ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ଫଳାଫଳ ବିଶ୍ଳେଷଣର ସଠିକତା ନିଶ୍ଚିତ ହୁଏ |ଯେତେବେଳେ Ct ମୂଲ୍ୟ 35 ରୁ ଅଧିକ, ପରୀକ୍ଷା ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଜିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତିକୁ ପରିମାଣିକ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିପାରିବ ନାହିଁ, କିନ୍ତୁ ଗୁଣାତ୍ମକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
3.2 ତରଳିବା ବକ୍ର:
ତରଳିବା ବକ୍ରର ଏକକ ଶିଖର ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଭଲ ଏବଂ ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇପାରିବ;ଯଦି ତରଳିବା ବକ୍ର ଦୁଇଗୁଣ କିମ୍ବା ଏକାଧିକ ଶିଖ ଦେଖାଏ, ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ |ତରଳିବା ବକ୍ର ଡବଲ୍ ଶିଖର ଦେଖାଏ, ଏବଂ ଟାର୍ଗେଟ୍ ନଥିବା ଶିଖରଟି ପ୍ରାଥମିକ ଡାଇମର୍ କିମ୍ବା ଡିଏନ୍ଏ ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ -ାରା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାର ନୁହେଁ କି ନାହିଁ ତାହା ବିଚାର କରିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଯଦି ଏହା ଏକ ପ୍ରାଇମର୍ ଡାଇମର୍ ଅଟେ, ତେବେ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ହ୍ରାସ କରିବାକୁ କିମ୍ବା ଉଚ୍ଚ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା ସହିତ ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକୁ ପୁନ es ଡିଜାଇନ୍ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ଯଦି ଏହା ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି, ଦୟାକରି ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବ increase ାନ୍ତୁ, କିମ୍ବା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ସହିତ ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକୁ ପୁନ es ଡିଜାଇନ୍ କରନ୍ତୁ |
ଟିପ୍ପଣୀ |
ଆପଣଙ୍କର ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ଏବଂ ନିରାପତ୍ତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଦୟାକରି ଆବଶ୍ୟକ PPE, ଏହିପରି ଲ୍ୟାବ କୋଟ୍ ଏବଂ ଗ୍ଲୋଭସ୍ ପିନ୍ଧନ୍ତୁ!
ଏହି ଉତ୍ପାଦ କେବଳ ଅନୁସନ୍ଧାନ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ!