ସିଧାସଳଖ PCR କିଟ୍ ଲଗାନ୍ତୁ |
ବିଲେଇ ନଂ: HCR2020A |
ଉଦ୍ଭିଦ ସିଧାସଳଖ PCR କିଟ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ପତ୍ର, ମଞ୍ଜି ଇତ୍ୟାଦିର ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ, ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନାଗୁଡିକର ଉଚ୍ଚ-ଥ୍ରୋପ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ ଯେଉଁଥିରେ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଏବଂ ପଲିଫେନୋଲ୍ ନାହିଁ |ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ବିବର୍ତ୍ତନ ଉପରେ ଆଧାର କରି ସିଧାସଳଖ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡିକରେ PCR ଇନହିବିଟରଗୁଡିକ ପାଇଁ ଉନ୍ନତ ସହନଶୀଳତା |ଏହି ସମୟରେ, ଏହା ଉଚ୍ଚ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ବଜାୟ ରଖେ, ଯାହା 5 kb ମଧ୍ୟରେ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |କିଟ୍ ରେ ଥିବା ଅନନ୍ୟ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ A ତାଜା କିମ୍ବା ଫ୍ରିଜ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁକୁ ଲାଇସ୍ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରେ |ଏହା କାର୍ଯ୍ୟ କରିବା ସହଜ ଏବଂ ଲାଇସେଟ୍ ଶୁଦ୍ଧତା ବିନା ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରେ |ସିଷ୍ଟମରେ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଏଜେଣ୍ଟ ରହିଥାଏ ଯାହା ଅଶୋଧିତ ନମୁନାକୁ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇବା ପରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ |2 × ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ୍ ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସ କେବଳ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରିବା ପାଇଁ କେବଳ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଯୋଡିବା ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଯାହା ଦ୍ pip ାରା ପାଇପେଟିଂ ଅପରେସନ୍ ହ୍ରାସ ହୁଏ ଏବଂ ଫଳାଫଳର ଚିହ୍ନଟ ଥ୍ରୋପପୁଟ୍ ଏବଂ ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତିରେ ଉନ୍ନତି ହୁଏ |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | 50 RXNS | 200 RXNS |
| 2 × ଉଦ୍ଭିଦ ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ | | 1.25 ମି.ଲି. | 4 × 1.25 ମି.ଲି. |
| ଉଦ୍ଭିଦ ସିଧାସଳଖ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ଏ | 5 ମି.ଲି. | 20 ମି.ଲି. |
| ଉଦ୍ଭିଦ ସିଧାସଳଖ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ବି * | 5 ମି.ଲି. | 20 ମି.ଲି. |
* ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ୍ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ବି ହେଉଛି ଏକ ଇଚ୍ଛାଧୀନ ରିଜେଣ୍ଟ୍, ଯାହା ନମୁନାଗୁଡିକର ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟ ବ olong ାଇବା ପାଇଁ ପ୍ଲାଣ୍ଟ୍ ଡାଇରେକ୍ଟ୍ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ A କୁ ନିରପେକ୍ଷ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ପ୍ରକୃତ ପରିସ୍ଥିତି ଅନୁଯାୟୀ ଏହାକୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
2 Direct ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସ, -30 ~ -15 at ରେ ଷ୍ଟୋର୍ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୱିଂରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |ସିଧାସଳଖ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ଲଗାନ୍ତୁ, -30 ~ -15 ℃ କିମ୍ବା 2 ~ 8 at ରେ ଷ୍ଟୋର୍ କରନ୍ତୁ |
ପରୀକ୍ଷଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା |
ନମୁନା ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ |-ଉଦ୍ଭିଦ ପତ୍ର |
ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ ପଦ୍ଧତି:ଛୋଟ ପତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ଏକ ଛୋଟ ଏବଂ ୟୁନିଫର୍ମ ନମୁନା ପାଇବା ପାଇଁ 0.5 - 3 ମିଲିମିଟର ସ୍ଥିର ବ୍ୟାସ ବିଶିଷ୍ଟ ଏକ ଛିଦ୍ର ପଞ୍ଚ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ ନମୁନାକୁ ସିଧାସଳଖ PCR ସିଷ୍ଟମରେ ଯୋଡନ୍ତୁ (50 μl ସିଷ୍ଟମ ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ) |ଟିପନ୍ତୁ, ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ନମୁନାଟି PCR ସମାଧାନରେ ଅଛି ଏବଂ ଟ୍ୟୁବ୍ କାନ୍ଥ ବିରୁଦ୍ଧରେ ନୁହେଁ |ଲମ୍ବା ଖଣ୍ଡ ଏବଂ ଜଟିଳ ନମୁନାକୁ ବ ify ାଇବା ପାଇଁ ଯଦି ସିଧାସଳଖ PCR ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ଏକ ଛୋଟ ବ୍ୟାସ (0.5 - 1 ମିଲିମିଟର) ସହିତ ଏକ ନମୁନା ବ୍ୟବହାର କରି ଉତ୍ତମ ଫଳାଫଳ ପାଇବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିଥାଏ |
ଗ୍ରାଇଣ୍ଡିଂ ଲାଇସିସ୍ ପଦ୍ଧତି:ଛୋଟ ପତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ପତ୍ରର ଏକ ଛୋଟ ଖଣ୍ଡ (ପ୍ରାୟ 1 - 3 ମିମି ବ୍ୟାସ) ନିଅ, ଏହାକୁ 20 μl ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ଅବରେ ରଖ, ଏବଂ ଯଥାସମ୍ଭବ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡ୍ କର (ଏହି ପଦକ୍ଷେପଟି 100 μl ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ ସହିତ ପତ୍ରକୁ ଚିପି କରି କରାଯାଇପାରିବ | ନମୁନାକୁ ମାଶ୍ କରିବାକୁ) |ଯଦି ଅଧିକ ପରିମାଣର ପତ୍ର ଟିସୁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ (7 ମିମିରୁ ଅଧିକ ହେବ ନାହିଁ), dilution ବଫର୍ ର ପରିମାଣକୁ 50 μl କୁ ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ |ପତ୍ରଗୁଡିକ ଭୂମି ହେବା ପରେ ସମାଧାନ ସବୁଜ ଦେଖାଯିବା ଉଚିତ |ଏକ ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ପରେ, ଏକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ PCR ସିଷ୍ଟମରେ 1 μl ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
ଥର୍ମାଲ୍ ଲାଇସିସ୍ ପଦ୍ଧତି:ଛୋଟ ପତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ପତ୍ରର ଏକ ଛୋଟ ଖଣ୍ଡ (ପ୍ରାୟ 1 - 3 ମିମି ବ୍ୟାସ) ନିଅ, ଏହାକୁ 20 μl ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ A ରେ ରଖ, ଏବଂ 5 - 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 95 ° C ରେ ଗରମ କର |ଲାଇସିସ୍ ସମୟ ପତ୍ରଗୁଡିକ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ ବିସ୍ତାର କରାଯାଇପାରେ ଯାହା ଲାଇସ୍ କରିବା କଷ୍ଟକର (20 ମିନିଟରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ) |ଯଦି ଅଧିକ ପରିମାଣର ପତ୍ର ଟିସୁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ (7 ମିମିରୁ ଅଧିକ ହେବ ନାହିଁ), dilution ବଫର୍ ର ପରିମାଣକୁ 50 μl କୁ ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ |ଗରମ କରିବା ପରେ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ ସଂକ୍ଷେପରେ, ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ PCR ସିଷ୍ଟମରେ 1 μl ଅଲ ern କିକ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
ନମୁନା ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ |ପ୍ଲାଣ୍ଟ ବିହନ |
ଗ୍ରାଇଣ୍ଡିଂ ଲାଇସିସ୍ ପଦ୍ଧତି:5 ମିଲିମିଟର ବ୍ୟାସ ବିଶିଷ୍ଟ ମଞ୍ଜି କାଟିବା ପାଇଁ ଏକ ସ୍କାଲପେଲ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏହାକୁ ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ A ର 100 μl ରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ଏକ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ କିମ୍ବା ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଉପକରଣ ସହିତ ନମୁନାକୁ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡ୍ କରନ୍ତୁ |ଭର୍ଟେକ୍ସ ସଂକ୍ଷେପରେ ଏବଂ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ 3 - 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଛିଡା ହେବାକୁ ଦିଅ |ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ବିହନ ନମୁନା ମିଶ୍ରିତ ବଫର୍ରେ ବୁଡ଼ି ଯାଇଛି |ଏକ ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ପରେ, ଏକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ PCR ସିଷ୍ଟମରେ 1 μl ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
ଥର୍ମାଲ୍ ଲାଇସିସ୍ ପଦ୍ଧତି:5 ମିଲିମିଟର ବ୍ୟାସ ବିଶିଷ୍ଟ ମଞ୍ଜି କାଟିବା ପାଇଁ ଏକ ସ୍କାଲପେଲ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏହାକୁ ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ A ର 100 μl ରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ 5 - 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 95 ° C ରେ ଗରମ କରନ୍ତୁ |ଲାଇସିସ୍ ସମୟ ପତ୍ରଗୁଡିକ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ ବିସ୍ତାର କରାଯାଇପାରେ ଯାହା ଲାଇସ୍ କରିବା କଷ୍ଟକର (30 ମିନିଟରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ) |ଗରମ କରିବା ପରେ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ସଂକ୍ଷେପରେ, ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ PCR ସିଷ୍ଟମରେ 1 μl ଅଲ ern କିକ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
a।ଉପଯୁକ୍ତ ଆକାରର ନମୁନା କାଟିବା ପାଇଁ କଞ୍ଚା କିମ୍ବା ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଉପକରଣ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରେ;ଯଦି ପଞ୍ଚ କିମ୍ବା କଞ୍ଚା ପୁନ used ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ନମୁନା ମଧ୍ୟରେ କ୍ରସ୍ ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ସେମାନଙ୍କୁ 2% ସୋଡିୟମ୍ ହାଇପୋକ୍ଲୋରାଇଟ୍ ଦ୍ରବଣ ସହିତ ସଫା କରାଯିବା ଉଚିତ |
ଖ।ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ପ୍ଲାଣ୍ଟ ସିଧାସଳଖ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ତରଳି ଯାଇଛି |ଯଦି ବଫର୍ ଭିଜକ୍ସିସ୍ ଥାଏ କିମ୍ବା ଏହାର ପରିମାଣ ଥାଏ, ଏହାକୁ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଏହାକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ତରଳାଇବା ପାଇଁ 37 at ରେ ଗରମ କରାଯାଇପାରେ |
ଗ।ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ ଟେମ୍ପଲେଟର ଭଲ୍ୟୁମ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ସାମଗ୍ରୀର ପରିମାଣର ପାର୍ଥକ୍ୟ ଅନୁଯାୟୀ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଆଡଜଷ୍ଟ ହୋଇପାରିବ |
ସିଧାସଳଖ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ଲଗାନ୍ତୁ |
ଅଧିକାଂଶ ଉତ୍ପାଦ ଟିସୁର ଜିନୋମକୁ ମୁକ୍ତ କରିବା ପାଇଁ ଏହି ଉତ୍ପାଦରେ ଥିବା ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ A କୁ କଠୋର ଭାବରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରାଯାଇଛି ଏବଂ ଅଶୋଧିତ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡିକର ସ୍ୱଳ୍ପକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ 4 at ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଅଟେ |ଯଦି ନମୁନାକୁ ଅଧିକ ସମୟ ପାଇଁ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 1 - 2 ମାସ), ଅଲ ern କିକ ତତ୍ତ୍ୱକୁ ଏକ ନୂତନ ଇପି ଟ୍ୟୁବକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରିବାକୁ ଏବଂ ଏହାକୁ -20 at ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ଅଧିକ ସ୍ଥିର ଭାବରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ, ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ସୁପରନେଟାଣ୍ଟରେ ସମାନ ପରିମାଣର ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଡାଇରେକ୍ଟ୍ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ବି ଯୋଗ କରନ୍ତୁ, ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ -20 at ରେ ଷ୍ଟୋର୍ କରନ୍ତୁ |ସ୍ଥିର ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟ ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନା ଏବଂ ଅବସ୍ଥା ସହିତ ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମ୍ |
| ddH2O | 20.0 µl ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | 50.0 µl ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |
| 2 × ଉଦ୍ଭିଦ ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ |a | 10.0 µl | 25.0 µ |
| ପ୍ରାଥମିକ 1 (10 µM) | 0.8 µl | 2.0 µl |
| ପ୍ରାଥମିକ 2 (10 µM)b | 0.8 µl | 2.0 µl |
| ଉଦ୍ଭିଦ ପତ୍ର / ଅଶୋଧିତ ନିର୍ବାହ ନମୁନା |(ନମୁନା ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣକୁ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ) | 0.5 - 3 ମିମି ପତ୍ର ଡିସ୍କ / x µl | | 0.5 - 3 ମିମି ପତ୍ର ଡିସ୍କ / x µl | |
a।ଏଥିରେ Mg ଥାଏ |2+2 ମିଟର ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତାରେ |
ଖ।ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରାଇମର୍ ପାଇଁ 0.4μM ର ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ପ୍ରାଇମରଗୁଡିକର ଅତ୍ୟଧିକ ବ୍ୟବହାର ବର୍ଦ୍ଧିତ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନକୁ ଆଣିବ |
ଗ।ବ୍ୟବହୃତ ନମୁନା ପରିମାଣ ପ୍ରକୃତ ପରିସ୍ଥିତି ଅନୁଯାୟୀ ସଜାଡିହେବ |ଅଶୋଧିତ ଲାଇସେଡ୍ ନମୁନାର ଏକକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବହୃତ ପରିମାଣ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ସମୁଦାୟ ପରିମାଣର 2% - 20% ମଧ୍ୟରେ ସଜାଡିହେବ |ଅତ୍ୟଧିକ ନମୁନା ବ୍ୟବହାର କରିବା ଦ୍ୱାରା ବିସ୍ତାର ବିଫଳତା ହୋଇପାରେ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କାର୍ଯ୍ୟକ୍ରମ
| ପଦକ୍ଷେପ | ତାପମାତ୍ରା | ସମୟ |
| ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଅବନତି | 98 ℃ | 5 ମିନିଟ୍ |
| ଅବନତି | 95 ℃ | 10 ସେକେଣ୍ଡ୍ |
| ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ | | 58 ~ 72 ℃ | 15 ସେକେଣ୍ଡ୍ |
| ସମ୍ପ୍ରସାରଣ | 72 ℃ | 30 ସେକେଣ୍ଡ୍ |
| ଅନ୍ତିମ ବିସ୍ତାର | 72 ℃ | 5 ମିନିଟ୍ |
a।ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଡେନାଟୁରେସନ୍ (98 ℃, 5 ମିନିଟ୍) ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁର ଲାଇସିସ୍ କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ, ଜେନୋମିକ୍ DNA ମୁକ୍ତ କରେ ଯାହା PCR ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରେ |ସମୟକୁ ଛୋଟ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ କିମ୍ବା ତାପମାତ୍ରା ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |
ଖ।ଏହାକୁ ପ୍ରାଥମିକ Tm ମୂଲ୍ୟ ସହିତ ସମାନ କିମ୍ବା Tm ମୂଲ୍ୟଠାରୁ 2 ~ 4 ℃ ଅଧିକ ସେଟ୍ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ଏହି ଉତ୍ପାଦରେ ବ୍ୟବହୃତ ସିଧାସଳଖ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ପାରମ୍ପାରିକ Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଠାରୁ ଭିନ୍ନ, ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ପାଇଁ ବିଶେଷ ଆବଶ୍ୟକତା ରହିଛି high ଉଚ୍ଚ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାର ବ୍ୟବହାର ଅଜ୍ଞାତ ବର୍ଦ୍ଧନକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ ଏବଂ ବର୍ଦ୍ଧନ ଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିପାରିବ |ଜଟିଳ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ ପାଇଁ, ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାକୁ ସଜାଡିବା ଏବଂ ବିସ୍ତାର ସମୟ ବ olong ାଇ ଦକ୍ଷ ବର୍ଦ୍ଧନ ହାସଲ କରାଯାଇପାରିବ |
ଗ।ଯଦି ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦ୍ରବ୍ୟର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ≤1 kb, ବିସ୍ତାର ସମୟ 30 ସେକେଣ୍ଡ / kb ରେ ସ୍ଥିର ହୋଇଛି;ଯଦି ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦ୍ରବ୍ୟର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ> 1 kb, ବିସ୍ତାର ସମୟ 60 ସେକେଣ୍ଡ / kb ରେ ସେଟ୍ ହୋଇଛି |
d।କମ୍ ନମୁନା ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ କମ୍ ନମୁନା କିମ୍ବା ନମୁନା ପାଇଁ, ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ 40 -50 ଚକ୍ରକୁ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରେ |
ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ
ଏହା ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁଗୁଡିକର ସିଧାସଳଖ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନାଗୁଡିକର ଉଚ୍ଚ-ଥ୍ରୋପଟ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପାଇଁ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ, ଯେଉଁଥିରେ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଏବଂ ପଲିଫେନୋଲ୍ ନାହିଁ |
ଟିପ୍ପଣୀ |
ଅନୁସନ୍ଧାନ ପାଇଁ କେବଳ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ |ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ପ୍ରଣାଳୀରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ନୁହେଁ |
1. ଅଶୋଧିତ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି କିମ୍ବା ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ, ସିଷ୍ଟମ୍, ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଅପରେସନ୍ ସଠିକ୍ ଅଛି କି ନାହିଁ ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ପରୀକ୍ଷଣ ଆରମ୍ଭ କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଶୁଦ୍ଧ ଜେନୋମିକ୍ DNA କୁ ଏକ ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
2. ଏହି କିଟ୍ ରେ ବ୍ୟବହୃତ ସିଧାସଳଖ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ର ଦୃ strong ପ୍ରୁଫ୍ରେଡିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି |ଯଦି TA କ୍ଲୋନିଂ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ଆଡେନାଇନ୍ ଯୋଡିବା ପୂର୍ବରୁ DNA କୁ ଶୁଦ୍ଧ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
3. ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ଗାଇଡାନ୍ସ ：
a।ପ୍ରାଥମିକତାର 3 ′ ଶେଷରେ ଶେଷ ଆଧାର G କିମ୍ବା C ହେବା ପାଇଁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
ଖ।ପ୍ରାଇମର 3 ′ ଶେଷରେ ଶେଷ 8 ଟି ଆଧାରରେ କ୍ରମାଗତ ମେଳ ଖାଇବାକୁ ହେବ ନାହିଁ |ଗ।ପ୍ରାଇମର 3 ′ ଶେଷରେ ହେୟାରପିନ ଗଠନରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
d।ଫରୱାର୍ଡ ପ୍ରାଇମରର Tm ମୂଲ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଏବଂ ଓଲଟା ପ୍ରାଇମର୍ 1 more ରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ ନୁହେଁ ଏବଂ Tm ମୂଲ୍ୟ 60 ~ 72 adjusted ରେ ସଜାଡିବା ଉଚିତ (Tm ମୂଲ୍ୟ ଗଣନା କରିବାକୁ ପ୍ରାଇମର୍ ପ୍ରିମିୟର୍ 5 ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ) |
ଇ।ଅତିରିକ୍ତ ଅତିରିକ୍ତ ପ୍ରାଇମର୍ କ୍ରମ ଯାହା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସହିତ ମେଳ ଖାଉ ନାହିଁ, ପ୍ରାଥମିକ Tm ମୂଲ୍ୟ ଗଣନା କରିବା ସମୟରେ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରାଯିବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |
f।ପ୍ରାଥମିକର GC ବିଷୟବସ୍ତୁ 40% -60% ହେବା ପାଇଁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
g।ପ୍ରାଥମିକରେ A, G, C ଏବଂ T ର ସାମଗ୍ରିକ ବଣ୍ଟନ ଯଥାସମ୍ଭବ ହେବା ଉଚିତ |ଉଚ୍ଚ GC କିମ୍ବା AT ବିଷୟବସ୍ତୁ ସହିତ ଅଞ୍ଚଳ ବ୍ୟବହାର କରିବା ଠାରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
ଘ।ପ୍ରାଇମର୍ ଭିତରେ କିମ୍ବା ଦୁଇଟି ପ୍ରାଇମର୍ ମଧ୍ୟରେ 5 କିମ୍ବା ଅଧିକ ବେସର ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ କ୍ରମର ଉପସ୍ଥିତିରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ ଏବଂ ଦୁଇଟି ପ୍ରାଇମରର 3 ′ ଶେଷରେ 3 କିମ୍ବା ଅଧିକ ବେସର ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ କ୍ରମର ଉପସ୍ଥିତିରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
i।ଅଜ୍ଞାତ ବିସ୍ତାରକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ପ୍ରାଇମରର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଯାଞ୍ଚ କରିବାକୁ NCBI ବ୍ଲାଷ୍ଟ ଫଙ୍କସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |
