2 × ସେନ୍ସି ସିଧାସଳଖ ପ୍ରେମିକ୍ସ- UNG (ଅନୁସନ୍ଧାନ qPCR)
ବିଲେଇ ନଂ: HCB5151A |
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) DNA ନିଷ୍କାସନ କିମ୍ବା ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି ବିନା ନମୁନାରୁ PCR କୁ ସିଧାସଳଖ କରିବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି |ଏହି ରିଜେଣ୍ଟରେ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍, ୟୁରାସିଲ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଗ୍ଲାଇକୋସାଇଲେସ୍ (UNG), RNase Inhibitor, MgCl ଗଠିତ |2, ପରିମାଣିକ PCR (qPCR) ପାଇଁ, dNTP (dTTP ପରିବର୍ତ୍ତେ dUTP ସହିତ), ଏବଂ ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର୍ |ଏହି ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଉଚ୍ଚ ନିରୋଧକ-ସହନଶୀଳତାକୁ ପ୍ରାଧାନ୍ୟ ଦେଇଥାଏ, ଏବଂ ଏହିପରି ଏହା ଡିଏନ୍ଏ ନିଷ୍କାସନ ବିନା ଗଳା ସ୍ ab ାବ୍, ଲାଳ, ଆଣ୍ଟି-କୋଏଗୁଲେଡ୍ ପୁରା ରକ୍ତ, ପ୍ଲାଜମା ଏବଂ ସେରମ୍ ଭଳି ନମୁନା ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇପାରେ |ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଆଣ୍ଟି-ଇନହିବିଟୋରୀ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ଏବଂ ୟୁଏନଜି ଏନଜାଇମର ମିଶ୍ରିତ ଏନଜାଇମ୍ ସହିତ qPCR ପାଇଁ ମାଲିକାନା ବଫର୍ ବ୍ୟବହାର କରେ |ତେଣୁ, ଏହା ଇନହିବିଟର ଧାରଣ କରିଥିବା ନମୁନାରେ ଟାର୍ଗେଟ ଜିନ୍ ର ଏକ ଭଲ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ହାସଲ କରିପାରିବ ଏବଂ PCR ଅବଶିଷ୍ଟ ଏବଂ ଏରୋସୋଲ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ଦ୍ false ାରା ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ପ୍ରତିରୋଧ କରିପାରିବ |ଏହି ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଅଧିକାଂଶ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ଯନ୍ତ୍ର ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ, ଯେପରିକି ଆପ୍ଲାଏଡ୍ ବାୟୋ ସିଷ୍ଟମ୍, ଏପେଣ୍ଡୋର୍ଫ, ବାୟୋ-ରେଡ୍, ରୋଚ୍ ଇତ୍ୟାଦି |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
1. 50 × ସେନ୍ସି ଡାଇରେକ୍ଟ୍ ଏନଜାଇମ୍ / ୟୁଏନ୍ଜି ମିକ୍ସ |
2. 2 × ସେନ୍ସି ଡାଇରେକ୍ଟ ପ୍ରେମିକ୍ସ ବଫର୍ (dUTP)
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ସମସ୍ତ ଉପାଦାନଗୁଡିକ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପାଇଁ -20 at ଏବଂ 3 months ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ରଖିବା ଉଚିତ୍ |ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଦୟାକରି ଥୋଇଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ପରେ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
ସାଇକେଲ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ |
| ପଦାଙ୍କ | ତାପମାତ୍ରା | ସମୟ | ଚକ୍ର |
| ହଜମ | 50 ℃ | 2 ମିନିଟ୍ | 1 |
| ପଲିମେରେଜ୍ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ | | 95 ℃ | 1-5 ମିନିଟ୍ | 1 |
| ପ୍ରତ୍ୟାଖ୍ୟାନ | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ / ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ | | 56-64 ℃ | 20-60s |
ପାଇପିଂ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ |
| Reagent | ପ୍ରତି ଭଲ୍ୟୁମ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା | ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରତି ଭଲ୍ୟୁମ୍ | ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା | |
| 2 × SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1 × |
| 50 × ସେନ୍ସି ଡାଇରେକ୍ଟ୍ ଏନଜାଇମ୍ / ୟୁଏନ୍ଜି ମିକ୍ସ | | 0.5µL | 1µL | 1 × |
| 25 × ପ୍ରାଇମର୍-ପ୍ରୋବ ମିକ୍ସ |1, 2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| ନମୁନା |3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| ସମୁଦାୟ ଭଲ୍ୟୁମ୍ | 25 μL | 50 μL | - |
1. ପ୍ରାଥମିକର ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ 0.2 0.2μM ଅଟେ |ଉତ୍ତମ ଫଳାଫଳ ପାଇଁ, ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା 0.2-1μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ |
2. ସାଧାରଣତ ,, ଅନୁସନ୍ଧାନର ଏକାଗ୍ରତା 0.1-0.3μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ |ପ୍ରୋବ୍ର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଏକାଗ୍ରତା ପ୍ରକୃତ ସମୟ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉପକରଣ, ଅନୁସନ୍ଧାନର ପ୍ରକାର ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଲେବେଲିଂ ପଦାର୍ଥର ପ୍ରକାର ସହିତ ଜଡିତ |ଦୟାକରି ଯନ୍ତ୍ରର ମାନୁଆଲ କିମ୍ବା ପ୍ରତ୍ୟେକ ଫ୍ଲୋରେସେଣ୍ଟ ଯା be ୍ଚର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆବଶ୍ୟକତାକୁ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ |
3. ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ନମୁନାରେ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଏବଂ ଇନହିବିଟରର ବିଷୟବସ୍ତୁ ଏବଂ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର କପି ସଂଖ୍ୟା ରହିଥାଏ |ପ୍ରକୃତ ପରିମାଣ ଦ୍ୱାରା ନମୁନା ଭଲ୍ୟୁମକୁ ବିଚାର କରାଯିବା ଉଚିତ |ଯଦି ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ମୁକ୍ତ ଜଳ କିମ୍ବା ଟି ବଫର୍ ଯୋଗ କରି ନମୁନାର ଏକ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |
4. ବିଭିନ୍ନ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଥିବା ପରିମାଣ:
| ନମୁନା | | ଗୋଟିଏ 50 ପାଇଁ ଭଲ୍ୟୁମ୍ μL ପ୍ରତିକ୍ରିୟା | ସର୍ବାଧିକ ଅନୁପାତ |
| ଆଣ୍ଟିକୋଏଗୁଲେଟେଡ୍ ପୁରା ରକ୍ତ | | 2.5 μL | 5% |
| ପ୍ଲାଜ୍ମା | 15 μL | 30% |
| ସେରମ୍ | | 10 μL | 20% | |
| ଗଳା ସ୍ ab ାବ୍ | | 10 μL | 20% | |
| ଲାଳ | 10 μL | 20% | |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
1. କାର୍ଯ୍ୟ ଚିହ୍ନଟ: qPCR ର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏବଂ ପୁନରାବୃତ୍ତି |
2. କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ: କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ଏବଂ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ନାହିଁ |
ଉତ୍ପାଦର ଟିପ୍ପଣୀ |
1. ଏହି ଉତ୍ପାଦରେ ଏକ ଉପନ୍ୟାସ ପ୍ରକାରର ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ନିୟୋଜିତ ହୋଇଛି, ଯାହାକି 1-5 ମିନିଟରେ ସକ୍ରିୟ ହୋଇପାରିବ | ଏହାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର୍ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥିବାରୁ ପ୍ରୋବ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରି ଏହା ଦ୍ୱିଗୁଣ କିମ୍ବା ଏକାଧିକ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ PCR ପାଇଁ ଅଧିକ ଉପଯୁକ୍ତ |
2. ଯଦି PCR ବିସ୍ତାରଣର Rn ମୂଲ୍ୟ ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍ କିମ୍ବା ବର୍ଦ୍ଧନ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ହୁଏ, ନମୁନା ପରିମାଣ ହ୍ରାସ ହୁଏ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରିମାଣ ବୃଦ୍ଧି ହୁଏ କିମ୍ବା ନମୁନାର ପୂର୍ବ ମିଶ୍ରଣ ଫଳାଫଳକୁ ଉନ୍ନତ କରିପାରେ |
3. ରକ୍ତ, ଲାଳ, ପରିସ୍ରା, ଗଳା ସ୍ ab ାବ ଇତ୍ୟାଦି ସଂଗ୍ରହ କ୍ଲିନିକାଲ ମାନଦଣ୍ଡର ଆବଶ୍ୟକତା ଅନୁସରଣ କରିବା ଉଚିତ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅବକ୍ଷୟକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ତାଜା ନମୁନା ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
4. ଯେହେତୁ ବିଭିନ୍ନ ଆମ୍ପଲିକନ୍ ଗୁଡିକରେ DUTP ପାଇଁ ଭିନ୍ନ ବ୍ୟବହାର ଦକ୍ଷତା ଏବଂ UNG ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଅଛି, ଯଦି UNG ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ହ୍ରାସ ହୁଏ ତେବେ ପୁନ ag ଗୁଡିକ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ |ଆବଶ୍ୟକ ହେଲେ ବ technical ଷୟିକ ସହାୟତା ପାଇଁ ଦୟାକରି ଆମ ସହିତ ଯୋଗାଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
5. ଗୋଟିଏ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମଧ୍ୟରେ ବହନ କରୁଥିବା PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକର ବିସ୍ତାରକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ବର୍ଦ୍ଧିତ ପାଇଁ ଉତ୍ସର୍ଗୀକୃତ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ କ୍ଷେତ୍ର ଏବଂ ପାଇପେଟ୍ ଆବଶ୍ୟକ |ଗ୍ଲୋଭସ୍ ସହିତ କାର୍ଯ୍ୟ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବାରମ୍ବାର ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତୁ ଏବଂ PCR ବିସ୍ତାର ପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବ୍ ଖୋଲନ୍ତୁ ନାହିଁ |
