ପ୍ରୋଟିନେଜ୍ କେ NGS (ପାଉଡର)
ବିଲେଇ ନଂ: HC4507A |
ଉଚ୍ଚ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ପ୍ରଶସ୍ତ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ସହିତ NGS ପ୍ରୋଟେଜ୍ କେ ହେଉଛି ଏକ ସ୍ଥିର ସିରାଇନ୍ ପ୍ରୋଟିଜ୍ |ତେଣୁ, ପ୍ରୋଟିନକୁ କ୍ଷୁଦ୍ର ପେପ୍ଟାଇଡରେ ପରିଣତ କରିବା ପାଇଁ ଏହା ପ୍ରାୟତ। ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |NGS Protease K ହେଉଛି Asp ସହିତ ଏକ ସାଧାରଣ ସିରାଇନ୍ ପ୍ରୋଟିସ୍ |39-ସେ69-ସେର୍224କାଟାଲାଇଟିକ୍ ଟ୍ରାଇଡ୍ ଯାହା ସିରାଇନ୍ ପ୍ରୋଟିଜ୍ ପାଇଁ ଅତୁଳନୀୟ, ଏବଂ କାଟାଲାଇଟିସ୍ କେନ୍ଦ୍ର ଟା Ca ଦ୍ୱାରା ଘେରି ରହିଛି |2+ସ୍ଥିରତା ପାଇଁ ସାଇଟଗୁଡିକ ବାନ୍ଧିବା, ଏକ ବ୍ୟାପକ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଉଚ୍ଚ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବଜାୟ ରଖିବା |
ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟକରଣ
| ଦୃଶ୍ୟ | ଧଳା ରୁ ଧଳା ଧଳା ଆମୋରଫସ୍ ପାଉଡର, ଲାଇଫିଲାଇଜଡ୍ | |
| ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ | | ≥40U / ମିଗ୍ରା କଠିନ | |
| DNase | କେହି ଚିହ୍ନଟ ହେଲେ ନାହିଁ | |
| RNase | କେହି ଚିହ୍ନଟ ହେଲେ ନାହିଁ | |
| ବାୟୋବର୍ଡେନ୍ | | ≤50CFU / g କଠିନ | |
| ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅବଶିଷ୍ଟ | | <5pg / mg କଠିନ | |
ଗୁଣଧର୍ମ
| ଉତ୍ସ | ତ୍ରିତିରିୟମ୍ ଆଲବମ୍ | |
| EC ସଂଖ୍ୟା | 3.4.21.64(Tritirachium ଆଲବମରୁ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ) |
| ମଲିକୁଲାର ଓଜନ | | 29kDa (SDS-PAGE) |
| ଇସୋଲେକ୍ଟ୍ରିକ୍ ପଏଣ୍ଟ | | 7.81 ଚିତ୍ର 1 |
| ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ pH | 7.0-12.0 (ସମସ୍ତେ ଉଚ୍ଚ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କରନ୍ତି) ଚିତ୍ର 2 | |
| ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା | | 65 ℃ ଚିତ୍ର 3 |
| pH ସ୍ଥିରତା | | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16h) ଚିତ୍ର 4 |
| ତାପଜ ସ୍ଥିରତା | | 50 ତଳେ (pH 8.0, 30min) ଚିତ୍ର 5 |
| ସଂରକ୍ଷଣ ସ୍ଥିରତା | | 12months ପାଇଁ 25 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇଛି ଚିତ୍ର 6 | |
| ସକ୍ରିୟକାରୀ | SDS, ୟୁରିଆ |
| ପ୍ରତିବନ୍ଧକ | | ଡାଇସୋପ୍ରୋପିଲ୍ ଫ୍ଲୋରୋଫୋସଫେଟ୍;ବେନଜିଲସୁଲଫୋନିଲ ଫ୍ଲୋରାଇଡ୍ | |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ଲାଇଫିଲାଇଜଡ୍ ପାଉଡରକୁ -25 ~ -15 at ରେ ଆଲୋକଠାରୁ ବହୁ ଦୂରରେ ରଖନ୍ତୁ;ବିଲୋପ ପରେ, ଆଲୋକଠାରୁ 2-8 ℃ ଦୂରରେ କିମ୍ବା ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପାଇଁ -25 ~ -15 at ଦୂରରେ ସ୍ୱଳ୍ପ ମିଆଦି ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଭଲ୍ୟୁମରେ ଆଲିକଟ୍ କରନ୍ତୁ |
ସତର୍କତା |
ବ୍ୟବହାର କିମ୍ବା ଓଜନ କରିବା ସମୟରେ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଗ୍ଲୋଭସ୍ ଏବଂ ଗଗଲ୍ ପିନ୍ଧନ୍ତୁ, ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପରେ ଭଲ ଚାଳିତ ରଖନ୍ତୁ |ଏହି ଦ୍ରବ୍ୟ ଚର୍ମର ଆଲର୍ଜି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ ଆଖିରେ ଗମ୍ଭୀର ଉତ୍ତେଜନା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ |ଯଦି ନିଶ୍ୱାସ ପ୍ରଶ୍ୱାସ ନିଆଯାଏ, ତେବେ ଏହା ଆଲର୍ଜି କିମ୍ବା ଆଜମା ଲକ୍ଷଣ କିମ୍ବା ଡିସପ୍ନିଆର କାରଣ ହୋଇପାରେ |ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟାରେ ଉତ୍ତେଜନା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
NGS ପ୍ରୋଟେଜ୍ କେ ର ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍ ମାନକ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ଅବସ୍ଥାରେ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ କେସିନ୍ କୁ 1 μmol L-tyrosine ରେ ଆବଶ୍ୟକ କରୁଥିବା ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି |
ପୁନ ag ପ୍ରସ୍ତୁତି |
| Reagent | ଉତ୍ପାଦକ | କାଟାଲଗ୍ |
| କେସିନ୍ ଯାନ୍ତ୍ରିକ |ବୋଭାଇନ୍ କ୍ଷୀରରୁ | | ସିଗମା ଆଲଡ୍ରିଚ୍ | | C7078 |
| NaOH | ସିନୋଫାର୍ମ କେମିକାଲ୍ |ରେଜେଣ୍ଟ କୋ।, ଲି। | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | ସିନୋଫାର୍ମ କେମିକାଲ୍ |ରେଜେଣ୍ଟ କୋ।, ଲି। | 20040718 |
| Na2HPO4 | | ସିନୋଫାର୍ମ କେମିକାଲ୍ |ରେଜେଣ୍ଟ କୋ।, ଲି। | 20040618 |
| ଟ୍ରାଇକ୍ଲୋରୋଏସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ | | ସିନୋଫାର୍ମ କେମିକାଲ୍ |ରେଜେଣ୍ଟ କୋ।, ଲି। | 80132618 |
| ସୋଡିୟମ୍ ଆସେଟେଟ୍ | | ସିନୋଫାର୍ମ କେମିକାଲ୍ |ରେଜେଣ୍ଟ କୋ।, ଲି। | 10018818 |
| ଏସିଟିକ୍ ଏସିଡ୍ | | ସିନୋଫାର୍ମ କେମିକାଲ୍ |ରେଜେଣ୍ଟ କୋ।, ଲି। | 10000218 |
| HCl | ସିନୋଫାର୍ମ କେମିକାଲ୍ |ରେଜେଣ୍ଟ କୋ।, ଲି। | 10011018 |
| ସୋଡିୟମ୍ କାର୍ବୋନାଟ୍ | | ସିନୋଫାର୍ମ କେମିକାଲ୍ |ରେଜେଣ୍ଟ କୋ।, ଲି। | 10019260 |
| ଫୋଲିନ୍-ଫେନୋଲ୍ | | ସାଙ୍ଗନ୍ ବାୟୋଟେକ୍ (ସାଂଘାଇ)କୋ।, ଲି। | A500467-0100 |
| L-tyrosine | ସିଗମା | | 93829 |
Reagent I:
ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍: ବୋଭାଇନ୍ ଦୁଗ୍ଧ ଦ୍ରବଣରୁ 1% କେସିନ୍: 1 ମି ବୋଭାଇନ୍ କ୍ଷୀର କେସିନ୍ କୁ 50 ମି.ଲି.ରେ 0.1 ମି ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ଦ୍ରବଣ, pH 8.0, 15 ମିନିଟ ପାଇଁ 65-70 ° C ରେ ପାଣି ସ୍ନାନରେ ଉତ୍ତାପ କରନ୍ତୁ, ଗୋଳାନ୍ତୁ ଏବଂ ତରଳାନ୍ତୁ, ପାଣି ସହିତ ଥଣ୍ଡା କରନ୍ତୁ | ସୋଡିୟମ୍ ହାଇଡ୍ରକ୍ସାଇଡ୍ ରୁ pH 8.0, ଏବଂ 100ml ରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
Reagent II:
TCA ସମାଧାନ: 0.1M ଟ୍ରାଇକ୍ଲୋରୋଏସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍, 0.2 ମି ସୋଡିୟମ୍ ଆସେଟେଟ୍ ଏବଂ 0.3 ମି ଏସିଟିକ୍ ଏସିଡ୍ (ଓଜନ 1.64g ଟ୍ରାଇକ୍ଲୋରୋଏସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ + 1.64g ସୋଡିୟମ୍ ଆସେଟେଟ୍ + 1.724 ମି.ଏଲ୍ ଏସିଟିକ୍ ଏସିଡ୍ କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ 50mL ଡିଓନାଇଜଡ୍ ପାଣି ମିଶାନ୍ତୁ, HCl ସହିତ pH 4.03 ରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ମିଶ୍ରିତ କରନ୍ତୁ | 100ml)
Reagent III:
0.4 ମିଟର ସୋଡିୟମ୍ କାର୍ବୋନାଟ୍ ଦ୍ରବଣ (ଓଜନ 4.24g ଆନ୍ହାଇଡ୍ରସ୍ ସୋଡିୟମ୍ କାର୍ବୋନାଟ୍ ଏବଂ 100mL ପାଣିରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ) |
Reagent IV:
ଫୋଲିନ୍ ଫେନୋଲ୍ ରିଜେଣ୍ଟ୍: ଡିଓନାଇଜଡ୍ ପାଣି ସହିତ times ଥର ମିଶ୍ରିତ କରନ୍ତୁ |
Reagent V:
ଏନଜାଇମ୍ ହଳଦିଆ: 0.1 ମି ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ସମାଧାନ, pH 8.0 |
Reagent VI:
L-tyrosine ମାନକ ସମାଧାନ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol / ml L-tyrosine 0.2M HCl ସହିତ ଦ୍ରବୀଭୂତ |
ପ୍ରଣାଳୀ
1. UV-Vis ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟର ଟର୍ନ୍ ଅନ୍ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଫୋଟୋମେଟ୍ରିକ୍ ମାପ ଚୟନ କରନ୍ତୁ |
2. ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟକୁ 660nm ଭାବରେ ସେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
3. ଜଳ ସ୍ନାନ ଟର୍ନ୍ ଅନ୍ କରନ୍ତୁ, ତାପମାତ୍ରାକୁ 37 set ସେଟ୍ କରନ୍ତୁ, ତାପମାତ୍ରା 3-5 ମିନିଟ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅପରିବର୍ତ୍ତିତ ନହେବାକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ |
4. 10mins ପାଇଁ 37 ℃ ପାଣି ସ୍ନାନରେ 2mL ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରେ 0.5mL ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଗରମ କରନ୍ତୁ |
5. ୧୦ ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ପ୍ରିହେଟେଡ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରେ m.m ମି.ଲି.ଖାଲି ଗୋଷ୍ଠୀ ଭାବରେ ଏନଜାଇମ୍ diluent ସେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
6. ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରେ ତୁରନ୍ତ 1.0 mL TCA ରେଜେଣ୍ଟ୍ ଯୋଡନ୍ତୁ |ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ପାଣି ସ୍ନାନରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
7. ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେଟ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନ |
8. ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କ୍ରମରେ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକୁ ଯୋଡନ୍ତୁ |
| Reagent | ଭଲ୍ୟୁମ୍ |
| ଅଲ ern କିକ | 0.5 ମି.ଲି. |
| 0.4 ମି ସୋଡିୟମ୍ କାର୍ବୋନାଟ୍ | | 2.5 ମି.ଲି. |
| ଫୋଲିନ୍ ଫେନୋଲ୍ ରିଜେଣ୍ଟ୍ | | 0.5 ମି.ଲି. |
9. 30 ମିନିଟ ପାଇଁ 37 water ପାଣି ସ୍ନାନରେ ଇନକ୍ୟୁବେସନ କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
10. OD660OD ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |1;ଖାଲି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ: OD ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଏନଜାଇମ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ବଦଳାଇବା ପାଇଁ ଏନଜାଇମ୍ diluent ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |660OD ଭାବରେ |2, ΔOD = OD1-OD2.
11. ଏଲ୍-ଟାଇରୋସିନ୍ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର: m.m ମି.ଲି.660L-tyrosine ର ବିଭିନ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା ପାଇଁ, ତାପରେ ମାନକ ବକ୍ର Y = kX + b ପ୍ରାପ୍ତ ହେଲା, ଯେଉଁଠାରେ Y ହେଉଛି L-tyrosine ଏକାଗ୍ରତା, X ହେଉଛି OD |600.
ଗଣନା
2: ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନର ମୋଟ ପରିମାଣ (mL)
0.5। :: ଏନଜାଇମ୍ ସମାଧାନର ପରିମାଣ (mL)
0.5: କ୍ରୋମୋଜେନିକ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ (mL) ରେ ବ୍ୟବହୃତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତରଳ ପରିମାଣ |
10: ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟ (ମିନିଟ୍)
Df: ମିଶ୍ରଣ ଏକାଧିକ |
C: ଏନଜାଇମ୍ ଏକାଗ୍ରତା (mg / mL)
ସଂଖ୍ୟା
ଚିତ୍ର 1 DNA ଅବଶିଷ୍ଟ |
| ନମୁନା | | ଆଭେ C4 | ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ | ପୁନରୁଦ୍ଧାର (pg / mg) | ପୁନରୁଦ୍ଧାର (%) | ସମୁଦାୟ ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ | ଏସିଡ୍ ( pg / mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK + STD2 | | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA- ମୁକ୍ତ H2O | | ଅନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ | | - | - | - |
ଚିତ୍ର 2 ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ pH
ଚିତ୍ର 3 ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା |
ଚିତ୍ର 4 pH ସ୍ଥିରତା |
ଚିତ୍ର 5 ତାପଜ ସ୍ଥିରତା |
ଚିତ୍ର 6 25 ରେ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ସ୍ଥିରତା |
