ମାଉସ୍ ଜେନୋଟାଇପିଂ କିଟ୍ |
ବିଲେଇ ନଂ: HCR2021A |
ଏହି ଉତ୍ପାଦଟି ଡିଏନ୍ଏ ଅଶୋଧିତ ନିଷ୍କାସନ ଏବଂ PCR ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ସହିତ ମାଉସ୍ ଜେନୋଟାଇପ୍ ର ଶୀଘ୍ର ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଛି |ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନେଜ୍ କେ ଦ୍ୱାରା ସରଳ ଖଣ୍ଡ ଖଣ୍ଡ ହେବା ପରେ ଉତ୍ପାଦଟି ସିଧାସଳଖ ମାଉସ୍ ଲାଞ୍ଜ, କାନ, ଆଙ୍ଗୁଠି ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଟିସୁରୁ PCR ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ |ରାତାରାତି ହଜମ, ଫେନୋଲ-କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ ନିଷ୍କାସନ କିମ୍ବା ସ୍ତମ୍ଭ ଶୁଦ୍ଧତା ନାହିଁ, ଯାହା ସରଳ ଏବଂ ପରୀକ୍ଷଣର ସମୟ ନଷ୍ଟ କରିଥାଏ |ଉତ୍ପାଦଟି 2kb ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିସ୍ତାର ଏବଂ 3 ଯୁଗଳ ପ୍ରାଇମର୍ ସହିତ ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |2 × ମାଉସ୍ ଟିସୁ ସିଧାସଳଖ PCR ମିକ୍ସରେ ଜେନେଟିକ୍ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ DNA ପଲିମେରେଜ୍, Mg ଥାଏ |2+, ଉଚ୍ଚ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ସହନଶୀଳତା ପ୍ରଦାନ କରିବାକୁ dNTP ଏବଂ ଏକ ଅପ୍ଟିମାଇଜଡ୍ ବଫର୍ ସିଷ୍ଟମ୍, ଯାହାଫଳରେ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ଯୋଗକରି ଏବଂ ଉତ୍ପାଦକୁ 1 × ରେ ରିହାଇଡ୍ରେଟ୍ କରି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରାଯାଇପାରିବ |ଏହି ଉତ୍ପାଦ ସହିତ ବର୍ଦ୍ଧିତ PCR ଉତ୍ପାଦର 3 ′ ଶେଷରେ ଏକ ପ୍ରତିଷ୍ଠିତ “A” ଆଧାର ଅଛି ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧ ହେବା ପରେ ସିଧାସଳଖ TA କ୍ଲୋନିଂ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
| ଉପାଦାନ | | ଆକାର | |
| 2, ମାଉସ୍ ଟିସୁ ସିଧାସଳଖ PCR ମିଶ୍ରଣ | | 5 × 1.0mL |
| ଲିସିସ୍ ବଫର୍ | | 2 × 20mL |
| ପ୍ରୋଟିନ୍ କେ | 800μL |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ 2 ବର୍ଷ ପାଇଁ -25 ~ -15 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ |ଥୋଇବା ପରେ, ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ସ୍ୱଳ୍ପ ମିଆଦି ଏକାଧିକ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ 2 ~ 8 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
ଆବେଦନ
ଏହି ଉତ୍ପାଦ ମାଉସ୍ ନକ୍ଆଉଟ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ, ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ ଚିହ୍ନଟ, ଜେନୋଟାଇପିଂ ଇତ୍ୟାଦି ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |
ବ Features ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ
୧।ସରଳ କାର୍ଯ୍ୟ: ଜେନୋମିକ୍ DNA ବାହାର କରିବାର ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ;
୨।ବ୍ୟାପକ ପ୍ରୟୋଗ: ବିଭିନ୍ନ ମାଉସ୍ ଟିସୁଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |
ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ
୧।ଜେନୋମିକ୍ DNA ରିଲିଜ୍ |
1) ଲାଇସେଟ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି |
ଲାଇସେଡ୍ ହେବାକୁ ଥିବା ମାଉସ୍ ନମୁନା ସଂଖ୍ୟା ଅନୁଯାୟୀ ଟିସୁ ଲାଇସେଟ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଏ (ଟିସୁ ଲାଇସେଟ୍ ଡୋଜ ଅନୁଯାୟୀ ସାଇଟରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହେବା ଉଚିତ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଉଚିତ), ଏବଂ ଗୋଟିଏ ନମୁନା ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକର ଅନୁପାତ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଅଟେ:
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ (μL) |
| ପ୍ରୋଟିନ୍ କେ | 4 |
| ଲିସିସ୍ ବଫର୍ | | 200 |
2) ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି ଏବଂ ଲିସିସ୍ |
ପରାମର୍ଶିତ ଟିସୁ ବ୍ୟବହାର |
| ପ୍ରକାରଟିସୁ | | ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଥିବା ଭଲ୍ୟୁମ୍ |
| ମାଉସ୍ ଲାଞ୍ଜ | | 1-3 ମିମି |
| ମାଉସ୍ କାନ | | 2-5 ମିମି |
| ମାଉସ୍ ଆଙ୍ଗୁଠି | | 1-2 ଖଣ୍ଡ | |
ପରିଷ୍କାର ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ ଟ୍ୟୁବରେ ଉପଯୁକ୍ତ ପରିମାଣର ମାଉସ୍ ଟିସୁ ନମୁନା ନିଅନ୍ତୁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍, ଭର୍ଟେକ୍ସ ଏବଂ କମ୍ପନରେ 200μL ତାଜା ଟିସୁ ଲାଇସେଟ୍ ମିଶାନ୍ତୁ, ତାପରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 55 at ରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଡ୍ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ 3 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 98 at ରେ ଗରମ କରନ୍ତୁ |
3) ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ |
5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 12,000 rpm ରେ ଲାଇସେଟ୍ ଭଲ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କୁ ହଲାନ୍ତୁ |ଅଲ ern କିକ ତତ୍ତ୍ୱକୁ PCR ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |ଯଦି ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପାଇଁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ତେବେ ଅଲ ern କିକ ତତ୍ତ୍ୱକୁ ଅନ୍ୟ ଏକ ଷ୍ଟେରାଇଲ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ ଏବଂ 2 ସପ୍ତାହ ପାଇଁ -20 at ରେ ଷ୍ଟୋର୍ କରନ୍ତୁ |
୨।PCR ବୃଦ୍ଧି
2 × ମାଉସ୍ ଟିସୁ ସିଧାସଳଖ PCR ମିକ୍ସକୁ -20 from ରୁ ବାହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବରଫରେ ଥବା କରନ୍ତୁ, ଓଲଟା ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ନିମ୍ନଲିଖିତ ସାରଣୀ ଅନୁଯାୟୀ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ (ବରଫରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରନ୍ତୁ):
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | 25μLସିଷ୍ଟମ୍ | 50μLସିଷ୍ଟମ୍ | ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା | |
| 2, ମାଉସ୍ ଟିସୁ ସିଧାସଳଖ PCR ମିଶ୍ରଣ | | 12.5μL | 25μL | 1 × |
| ପ୍ରାଥମିକ 1 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| ପ୍ରାଥମିକ 2 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| କ୍ଲିଭେଜ୍ ଉତ୍ପାଦ |a | ଆବଶ୍ୟକ ଅନୁଯାୟୀ | | ଆବଶ୍ୟକ ଅନୁଯାୟୀ | |
|
| ddH2O | 25μL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | 50μL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |
|
ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ:
କ) ଯୋଗ କରାଯାଇଥିବା ପରିମାଣ ସିଷ୍ଟମର 1/10 ରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ, ଏବଂ ଯଦି ଅଧିକ ଯୋଗ କରାଯାଏ, PCR ବିସ୍ତାରଣ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ହୋଇପାରେ |
PCR ସର୍ତ୍ତଗୁଡିକ ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଛି |
| ଚକ୍ର ପଦକ୍ଷେପ | ଟେମ୍ପ୍ | | ସମୟ | ଚକ୍ରଗୁଡିକ |
| ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ବିଭାଜନ | 94 ℃ | 5 ମିନିଟ୍ | 1 |
| ଅବନତି | 94 ℃ | 30 ସେକେଣ୍ଡ୍ | 35-40 |
| ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ |a | Tm + 3 ~ 5 ℃ | 30 ସେକେଣ୍ଡ୍ | |
| ସମ୍ପ୍ରସାରଣ | 72 ℃ | 30 ସେକେଣ୍ଡ / kb | |
| ଅନ୍ତିମ ବିସ୍ତାର | 72 ℃ | 5 ମିନିଟ୍ | 1 |
| - | 4 ℃ | ଧରନ୍ତୁ | | - |
ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ:
କ) ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା: ପ୍ରାଇମରର Tm ମୂଲ୍ୟକୁ ସୂଚାଇ, ଆନିଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାକୁ ପ୍ରାଥମିକ + 3 ~ 5 of ର ଛୋଟ Tm ମୂଲ୍ୟରେ ସେଟ୍ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |
ସାଧାରଣ ସମସ୍ୟା ଏବଂ ସମାଧାନ |
୧।କ targeted ଣସି ଟାର୍ଗେଟେଡ୍ ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ ନାହିଁ |
1) ଅତ୍ୟଧିକ ଲାଇସିସ୍ ଉତ୍ପାଦ |ସବୁଠାରୁ ଉପଯୁକ୍ତ ପରିମାଣର ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ବାଛନ୍ତୁ, ସାଧାରଣତ the ସିଷ୍ଟମର 1/10 ରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ;
2) ବହୁତ ବଡ ନମୁନା ଆକାର |ଲାଇସେଟ୍ କୁ 10 ଥର ହଳଦୀ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ତା’ପରେ ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ, କିମ୍ବା ନମୁନା ଆକାର ଏବଂ ପୁନ ly- ଲାଇସିସ୍ ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ;
)) ଟିସୁ ନମୁନା ସତେଜ ନୁହେଁ |ତାଜା ଟିସୁ ନମୁନା ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି;
4) ଖରାପ ପ୍ରାଥମିକ ଗୁଣ |ପ୍ରାଥମିକ ଗୁଣବତ୍ତା ଯାଞ୍ଚ କରିବା ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍କୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଜେନୋମିକ୍ DNA ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |
୨।ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି
1) ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବହୁତ କମ୍ ଏବଂ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ବହୁତ ଅଧିକ |ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି କର ଏବଂ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ହ୍ରାସ କର;
2) ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏକାଗ୍ରତା ବହୁତ ଅଧିକ |ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣ ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ କିମ୍ବା ଟେମ୍ପଲେଟକୁ ବୃଦ୍ଧି ପରେ 10 ଥର ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ;
3) ଖରାପ ପ୍ରାଥମିକତା |ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍କୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରନ୍ତୁ |
ଟିପ୍ପଣୀ |
୧।ନମୁନା ମଧ୍ୟରେ କ୍ରସ୍ ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ଏକାଧିକ ନମୁନା ସାଧନ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ବାରମ୍ବାର ବ୍ୟବହାର ଆବଶ୍ୟକ ହେଲେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ପରେ 2% ସୋଡିୟମ୍ ହାଇପୋକ୍ଲୋରାଇଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ କିମ୍ବା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ କ୍ଲିନର୍ ସହିତ ଉପକରଣଗୁଡ଼ିକର ପୃଷ୍ଠକୁ ସଫା କରାଯାଇପାରିବ |
୨।ତାଜା ମାଉସ୍ ଟିସୁ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି, ଏବଂ ବିସ୍ତାର ଫଳାଫଳକୁ ପ୍ରଭାବିତ ନକରିବା ପାଇଁ ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ ପରିମାଣ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |
3ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରହିବା ଉଚିତ୍ ଏବଂ ସ୍ୱଳ୍ପ ମିଆଦି ଏକାଧିକ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ 2 ~ 8 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ |ଯଦି କମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୁଏ, ତେବେ ବୃଷ୍ଟିପାତ ହୋଇପାରେ, ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣଭାବେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |
4PCR ମିକ୍ସ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରହିବା ଉଚିତ, ଏବଂ ସ୍ୱଳ୍ପ ମିଆଦି ବାରମ୍ବାର ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ 4 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ |
5ଏହି ଉତ୍ପାଦ କେବଳ ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଅନୁସନ୍ଧାନ ପାଇଁ ଅଟେ ଏବଂ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ନିରାକରଣ କିମ୍ବା ଚିକିତ୍ସାରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |
