ୱାଇଲ୍ଡ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ |
ଟାକ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ହେଉଛି ଥର୍ମସ୍ ଆକ୍ୱାଟିକସ୍ YT-1 ର ଏକ ଥର୍ମୋଷ୍ଟେବଲ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍, ଯେଉଁଥିରେ 5 ′ → 3 ′ ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ 5´ ଫ୍ଲାପ୍ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ରହିଛି |
ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |
| ଉପାଦାନ | | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × ଟକ୍ ବଫର୍ | | 2 × 1 ମି | 2 × 10 ମି | 2 × 50 ମି | 5 × 200 ମି |
| Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ (5 U / μL) | 0.1 ମି.ଲି. | 1 ମି | 5 ମି.ଲି. | 5 × 10 ମି |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
0 ° C ତଳେ ପରିବହନ ଏବଂ -25 ° C ~ -15 ° C ରେ ଗଚ୍ଛିତ |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍କୁ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି ଯାହାକି 15 nmol dNTP କୁ ଏସିଡ୍ ଦ୍ରବୀଭୂତ ପଦାର୍ଥରେ 30 ମିନିଟରେ 75 ° C ରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
1.ପ୍ରୋଟିନ୍ ଶୁଦ୍ଧତା ଅନୁଧ୍ୟାନ (SDS-PAGE):SDS-PAGE ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ Ta ାରା Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ର ଶୁଦ୍ଧତା ≥95% ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |
2.Endକାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:37 at ରେ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 1 μg λDNA ସହିତ ସର୍ବନିମ୍ନ 5 U Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସହିତ କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବକ୍ଷୟ ହୁଏ ନାହିଁ |
3.Exonuclease କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |:ସର୍ବନିମ୍ନ 5 U Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସହିତ 1 μg λ -Hind Ⅲ ହଜମ DNA 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 37 37 ରେ ℃ ଫଳାଫଳ ଅନୁଯାୟୀ କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବକ୍ଷୟ ହୁଏ ନାହିଁ |
4.ନିକେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |:37 ° C ରେ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ 5 U Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସହିତ 1 μg pBR322 DNA ସହିତ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ କ results ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବକ୍ଷୟ ହୁଏ ନାହିଁ |
5.RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |:37 ° C ରେ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 1.6 μg MS2 RNA ସହିତ ସର୍ବନିମ୍ନ 5 U Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସହିତ କ det ଣସି ଚିହ୍ନଟ ଯୋଗ୍ୟ ଅବକ୍ଷୟ ହୁଏ ନାହିଁ |
6.E. coliDNA:E. coli 16S rRNA ଲୋକସ୍ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ସହିତ TaqMan qPCR ବ୍ୟବହାର କରି ଇ କୋଲି ଜେନୋମିକ୍ DNA ର ଉପସ୍ଥିତି ପାଇଁ 5 U Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସ୍କ୍ରିନ କରାଯାଏ |E. coli genomic DNA ପ୍ରଦୂଷଣ ହେଉଛି ≤1 କପି |
7.PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ (5.0 kb ଲମ୍ବଡା DNA)- ଏକ 50 µL ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ 5 ng ଲମ୍ବଡା DNA ଧାରଣ କରି 5 ୟୁନିଟ୍ Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସହିତ 25 ଚକ୍ର PCR ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଆଶା କରାଯାଉଥିବା 5.0 kb ଉତ୍ପାଦରେ ଫଳାଫଳ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସେଟଅପ୍ |
| ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ | | ଭଲ୍ୟୁମ୍ |
| ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA |a | ବ al କଳ୍ପିକ |
| 10 μM ଅଗ୍ରଗାମୀ ପ୍ରାଇମର୍ | | 1 μL |
| 10 μM ଓଲଟା ପ୍ରାଇମର୍ | | 1 μL |
| dNTP ମିଶ୍ରଣ (ପ୍ରତ୍ୟେକ 10mM) | 1 μL |
| 10 × ଟକ୍ ବଫର୍ | | 5 μL |
| Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ |ଖ | 0.25 μL |
| ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ମୁକ୍ତ ଜଳ | | 50 μL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |
ଟିପ୍ପଣୀ:
1) ବିଭିନ୍ନ ଟେମ୍ପଲେଟର ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏକାଗ୍ରତା ଭିନ୍ନ ଅଟେ |ନିମ୍ନଲିଖିତ ସାରଣୀରେ 50 µL ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର ସୁପାରିଶ ହୋଇଥିବା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ବ୍ୟବହାର ଦର୍ଶାଯାଇଛି |
| DNA | | ପରିମାଣ |
| ଜେନୋମିକ୍ | | 1 ng-1 μg |
| ପ୍ଲାଜାମିଡ୍ କିମ୍ବା ଭାଇରାଲ୍ | | 1 pg-1 ng |
2) ବିଶେଷ ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକରେ Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଏକାଗ୍ରତା 0.25 µL ~ 1 µL ରୁ ହୋଇପାରେ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟାପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍
| ପଦାଙ୍କ | ତାପମାତ୍ରା(° C) | ସମୟ | ଚକ୍ରଗୁଡିକ |
| ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ବିଭାଜନa | 95 ℃ | 5 ମିନିଟ୍ | - |
| ଅବନତି | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 ଚକ୍ର | |
| ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ |ଖ | 60 ℃ | 15 s | |
| ସମ୍ପ୍ରସାରଣ | 72 ℃ | 1kb / ମିନିଟ୍ | |
| ଅନ୍ତିମ ବିସ୍ତାର | 72 ℃ | 5 ମିନିଟ୍ | - |
ଟିପ୍ପଣୀ:
1) ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଅବନତି ଅବସ୍ଥା ଅଧିକାଂଶ ବିସ୍ତାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଗଠନର ଜଟିଳତା ଅନୁଯାୟୀ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇପାରେ |ଯଦି ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଗଠନ ଜଟିଳ, ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଡେନାଟ୍ରେସନ୍ ପ୍ରଭାବକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରି-ଡେନାଟ୍ରେସନ୍ ସମୟ 5 - 10 ମିନିଟ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରେ |
2) ପ୍ରାଇମରର Tm ମୂଲ୍ୟ ଅନୁଯାୟୀ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାକୁ ସଜାଡିବା ଆବଶ୍ୟକ, ଯାହା ସାଧାରଣତ the ପ୍ରାଇମରର Tm ମୂଲ୍ୟଠାରୁ 3 ~ 5 ℃ କମ୍ ସେଟ୍ ହୋଇଛି |ଜଟିଳ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ ପାଇଁ, ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାକୁ ସଜାଡ଼ିବା ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ବିସ୍ତାର ସମୟ ବ extend ାଇବା ଆବଶ୍ୟକ |
