ସୁପରଷ୍ଟାର୍ଟ qPCR ପ୍ରେମିକ୍ସ ପ୍ଲସ୍- UNG |
ବିଲେଇ ନଂ: HCB5071E |
ସୁପରଷ୍ଟାର୍ଟ qPCR ପ୍ରେମିକ୍ସ ପ୍ଲସ୍- UNG ହେଉଛି ଏକ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ରିଜେଣ୍ଟ ଯାହା ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ଗୁଣାତ୍ମକ ଏବଂ ପରିମାଣିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ପ୍ରୋବ-ଆଧାରିତ ଚିହ୍ନଟ ବ୍ୟବହାର କରି ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଛି, ଲାଇଫିଲାଇଜେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ପାଇଁ ବିଶେଷ ଭାବରେ ବିକଶିତ |ଏଥିରେ ଏକ ଉପନ୍ୟାସ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଏନଜାଇମ ହଟଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ ପ୍ଲସ୍ (ଡିଜି) ଥାଏ, ଯାହାର ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ସିଲ୍ କରାଯାଇଥାଏ, ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା ଅବସ୍ଥାରେ ପ୍ରାଥମିକ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ କିମ୍ବା ପ୍ରାଇମର୍ ଡାଇମର୍ ଗଠନ ଦ୍ caused ାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ପ୍ରତିରୋଧ କରିଥାଏ | ବିସ୍ତାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା |ଏହି ରେଜେଣ୍ଟ ଦ୍ରୁତ ଗରମ ଆରମ୍ଭ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ qPCR ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବଫର୍ ଏବଂ UNG / dUTP ଆଣ୍ଟି-ପ୍ରଦୂଷଣ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରେ, qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଏବଂ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ବହୁଗୁଣିତ କରିଥାଏ |ଏହା ବହୁ ପରିମାଣର ପରିମାଣ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଭଲ ମାନକ ବକ୍ରତା ହାସଲ କରିପାରିବ ଏବଂ ପରିମାଣକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ କରିପାରିବ, ଅବଶିଷ୍ଟ PCR ଉତ୍ପାଦ କିମ୍ବା ଏରୋସୋଲ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ଦ୍ false ାରା ମିଥ୍ୟା ସକରାତ୍ମକ ବିସ୍ତାରକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ରୋକିପାରିବ |ଏହି ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଅଧିକାଂଶ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ଯନ୍ତ୍ର ସହିତ ଉତ୍ପାଦକ ଯେପରିକି ଆପ୍ଲାଏଡ୍ ବାୟୋ ସିଷ୍ଟମ୍, ଏପେଣ୍ଡୋର୍ଫ, ବାୟୋ-ରେଡ୍ ଏବଂ ରୋଚ୍ ଇତ୍ୟାଦି ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ ଅଟେ ଏବଂ ଲାଇଫିଲାଇଜଡ୍ ଫର୍ମରେ ଭଲ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ |
ପୁନ ag ରଚନା
1. 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ମାଗଣା) (ଡିଜି)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × ଲାଇପ୍ରୋଟେକ୍ଟାଣ୍ଟ (ବ al କଳ୍ପିକ)
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
-20 at ରେ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ;3 ମାସ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ 4 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ |ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇଙ୍ଗ୍ ଠାରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
ସାଇକେଲ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ |
| ପ୍ରଣାଳୀ | ଟେମ୍ପ୍ | | ସମୟ | ଚକ୍ର |
| ହଜମ | 50 ℃ | 2 ମିନିଟ୍ | 1 |
| ପଲିମେରେଜ୍ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ | | 95 ℃ | 1 ~ 5 ମିନିଟ୍ | 1 |
| ପ୍ରତ୍ୟାଖ୍ୟାନ | 95 ℃ | 10 ~ 20 s | 40-50 |
| ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ | | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR ତରଳ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା Syଷ୍ଟେମ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି |
|
ରଚନା |
25µL ଭଲ୍ୟୁମ୍ |
50µL ଭଲ୍ୟୁମ୍ |
ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା | |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG(Mg2+ମାଗଣା) (ଡିଜି) | 5µL | 10µL | 1 × |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 ମି |
| 4 × ଲିଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟାଣ୍ଟ |1 | 6.25µL | 12.5µL | 1 × |
| 25 × ପ୍ରାଇମର୍-ପ୍ରୋବ ମିକ୍ସ |2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA |3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | 50µL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | —— |
1. ପ୍ରାଥମିକମାନଙ୍କ ପାଇଁ 0.2μM ର ଏକ ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ good ଭଲ ଫଳାଫଳ ଦେଇଥାଏ;ଯେତେବେଳେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଖରାପ ହୁଏ, ଆବଶ୍ୟକତା ଅନୁଯାୟୀ 0.2-1μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ଆଡଜଷ୍ଟ କରନ୍ତୁ |ଅନୁକୂଳ ମିଶ୍ରଣ ଖୋଜିବା ପାଇଁ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ପରୀକ୍ଷଣ ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରୋବ୍ ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ 0.1 0.1-0.3μM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୁଏ |
2. ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଟେମ୍ପଲେଟରେ ଥିବା ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର କପି ସଂଖ୍ୟା ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ;ଯଦି ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଯୋଗ ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ dilution କରାଯାଇପାରିବ |
3. ଏହି ସିଷ୍ଟମ୍ ଲାଇଫିଲାଇଜ୍ ହୋଇପାରେ;ଯେତେବେଳେ ଗ୍ରାହକମାନେ ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଖାଇବା ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ଏହି ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି, 4 × ଲିଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟାଣ୍ଟ ଚୟନକରି ଯୋଡିହେବ; ଯଦି ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଖାଯାଇଥିବା ଦ୍ରବ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ଲିକ୍ୱିଡ୍ ରିଜେଣ୍ଟସ୍ ଷ୍ଟେଜ୍ ଉତ୍ପାଦ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ବ ation ଧତା ସମୟରେ, ଲାଇଫିଲାଇଜଡ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ସ୍ଥିରତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଏହା 4 × ଲିଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟାଣ୍ଟ ଯୋଗ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ | ଏବଂ ପ୍ରଭାବଗୁଡିକ
ଯେତେବେଳେ ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର ହୁଏ |d ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଖିବା ପାଇଁ, ପ୍ରସ୍ତୁତ କର | ସିଷ୍ଟମ୍ as ନିମ୍ନଲିଖିତ:
| ରଚନା | 25µL ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମ୍ | |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ମାଗଣା) (ଡିଜି) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4 × ଲିଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟାଣ୍ଟ | | 6.25µL |
| 25 × ପ୍ରାଇମର୍-ପ୍ରୋବ ମିକ୍ସ | | 1µL |
| ddH2O | 18 ~ 20µL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ | |
* ଯଦି ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଖାଇବା ପାଇଁ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ସିଷ୍ଟମ୍ ଆବଶ୍ୟକ, ଦୟାକରି ପୃଥକ ଭାବରେ ପରାମର୍ଶ କରନ୍ତୁ |
ଲିଓଫିଲାଇଜେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା |ss
| ପ୍ରଣାଳୀ | ଟେମ୍ପ୍ | | ସମୟ | ଅବସ୍ଥା | ଚାପ |
| ପ୍ରି-ଫ୍ରିଜ୍ | | 4 ℃ | 30 ମିନିଟ୍ | ଧରନ୍ତୁ | |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 ମିନିଟ୍ | ଥଣ୍ଡା | ||
| -50 ℃ | 180 ମିନିଟ୍ | ଧରନ୍ତୁ | | ||
| ପ୍ରାଥମିକ ଶୁଖାଇବା | | -30 ℃ | 60 ମିନିଟ୍ | ଉତ୍ତାପ |
ଅନ୍ତିମ ଶୂନ୍ୟସ୍ଥାନ | |
| -30 ℃ | 70 ମିନିଟ୍ | ଧରନ୍ତୁ | | ||
| ଦ୍ Secondary ିତୀୟ ଶୁଖାଇବା | | 25 ℃ | 60 ମିନିଟ୍ | ଉତ୍ତାପ |
ଅନ୍ତିମ ଶୂନ୍ୟସ୍ଥାନ | |
| 25 ℃ | 300 ମିନିଟ୍ | ଧରନ୍ତୁ | |
2. ଉପରୋକ୍ତ ଲାଇଫିଲାଇଜେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା କେବଳ ରେଫରେନ୍ସ ପାଇଁ |ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ପାଦ ପ୍ରକାର ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାୟର୍ଗୁଡ଼ିକର ଭିନ୍ନ ପାରାମିଟର ଅଛି, ତେଣୁ ପ୍ରକୃତ ଅନୁଯାୟୀ ସଂଶୋଧନ କରାଯାଇପାରିବ |ବ୍ୟବହାର ସମୟରେ ଅବସ୍ଥା |
3. ବିଭିନ୍ନ ଲାଇଫିଲାଇଜେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଲାଇଫିଲାଇଜଡ୍ ର ବିଭିନ୍ନ ବ୍ୟାଚ୍ ଆକାର ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ହୋଇପାରେ |ଉତ୍ପାଦ, ତେଣୁ ବୃହତ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହେଲେ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣ ବ valid ଧତା ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |
ଲାଇଫିଲାଇଜ୍ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ |d ପାଉଡର |
1. ଲାଇଫିଲାଇଜଡ୍ ପାଉଡରକୁ ସଂକ୍ଷେପରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍;
2. ଲିଓଫିଲାଇଜଡ୍ ପାଉଡରରେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ 25µL ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପାଣି ମିଶାନ୍ତୁ;
3. ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ମେସିନ୍ରେ ଚଲାନ୍ତୁ |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ:
1. କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ପରୀକ୍ଷଣ: ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା, qPCR ର ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତି |
2. କ No ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ, କ ex ଣସି ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏଣ୍ଡୋ / ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ନାହିଁ |
ଯାନ୍ତ୍ରିକ ସୂଚନା:
1. ସୁପରଷ୍ଟାର୍ଟ qPCR ପ୍ରେମିକ୍ସ ପ୍ଲସ୍- UNG ଏକ ଉପନ୍ୟାସ ହଟ୍-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଏନଜାଇମ୍ ବ୍ୟବହାର କରେ ଯାହା 1 ~ 5 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଦ୍ରୁତ ଗରମ ଆରମ୍ଭ କରିବାକୁ ସକ୍ଷମ କରେ |ସ୍ special ତନ୍ତ୍ର ବଫର୍ ସୂତ୍ର ମାଧ୍ୟମରେ ଏହା ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |
2. ଏହାର ଉଚ୍ଚ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଅଛି ଯାହା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ PCR ସୀମା ଚିହ୍ନଟର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ଉନ୍ନତ କରିଥାଏ, ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରଗୁଡିକ ସ୍ ization ାଭାବିକ କରିଥାଏ, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ ନିମ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକରେ ସ୍ପଷ୍ଟ ଉନ୍ନତି ପାଇଥାଏ, ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ PCR ଚିହ୍ନଟ ରେଜେଣ୍ଟ ପରି ଉପଯୁକ୍ତ |
3. କମ୍ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା କିମ୍ବା 200bp ଖଣ୍ଡରୁ ଅଧିକ ଲମ୍ବା ପ୍ରାଇମର୍ ପାଇଁ 3-ଷ୍ଟେପ୍ ପଦ୍ଧତି ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |
4. dUTP ର ଉପଯୋଗିତା ଦକ୍ଷତା ଏବଂ UNG ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ବିଭିନ୍ନ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ପାଇଁ ଭିନ୍ନ ଅଟେ, ତେଣୁ ଯଦି UNG ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା ଦ୍ det ାରା ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ହ୍ରାସ ହୁଏ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମକୁ ସଜାଡିବା ଏବଂ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ |ଯଦି ବ technical ଷୟିକ ସହାୟତା ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ ଦୟାକରି ଆମ କମ୍ପାନୀ ସହିତ ଯୋଗାଯୋଗ କରନ୍ତୁ |
5. ବର୍ଦ୍ଧିତ ପୂର୍ବରୁ ଏବଂ ପରେ ଉତ୍ସର୍ଗୀକୃତ କ୍ଷେତ୍ର ଏବଂ ପାଇପେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, କାର୍ଯ୍ୟ ସମୟରେ ଗ୍ଲୋଭସ୍ ପିନ୍ଧନ୍ତୁ ଏବଂ ବାରମ୍ବାର ବଦଳାନ୍ତୁ |PCR ଉତ୍ପାଦ ଦ୍ୱାରା ନମୁନା ପ୍ରଦୂଷଣକୁ କମ୍ କରିବା ପାଇଁ PCR ସମାପ୍ତ ହେବା ପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବ୍ ଖୋଲନ୍ତୁ ନାହିଁ |
