Rnase Inhibitor
ମୁରିନ୍ ଆରଏନ୍ଏସ୍ ଇନହିବିଟର ହେଉଛି ଏକ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର ଯାହା ଇ.କୋଲିରୁ ପ୍ରକାଶିତ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧ ହୋଇଛି |ଏହା ଅଣ-କୋଭାଲାଣ୍ଟ ବନ୍ଧନ ମାଧ୍ୟମରେ 1: 1 ଅନୁପାତରେ RNase A, B କିମ୍ବା C କୁ ବାନ୍ଧେ, ଯାହା ଦ୍ the ାରା ତିନୋଟି ଏନଜାଇମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ କରେ ଏବଂ RNA କୁ ଅବକ୍ଷୟରୁ ରକ୍ଷା କରେ |ତଥାପି, ଏହା Aspergillus ରୁ RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H କିମ୍ବା RNase ବିପକ୍ଷରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ନୁହେଁ |ମୁରାଇନ୍ ଆରଏନ୍ଏସ୍ ଇନହିବିଟର RT-PCR, RT-qPCR ଏବଂ IVT mRNA ଦ୍ tested ାରା ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ବ୍ୟବସାୟିକ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେସ୍, DNA ପଲିମେରାସ୍ ଏବଂ RNA ପଲିମେରାସ୍ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ ଥିଲା |
ମାନବ RNase ଇନହିବିଟର ତୁଳନାରେ, ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟରରେ ଦୁଇଟି ସିଷ୍ଟାଇନ୍ ଥାଏ ନାହିଁ ଯାହା ଅକ୍ସିଡେସନ୍ ପ୍ରତି ଅତ୍ୟଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଅଟେ ଯାହା ଇନହିବିଟରର ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ |ଏହାକୁ DTT ର କମ୍ ଏକାଗ୍ରତାରେ ସ୍ଥିର କରିବା (1 ମିଟରରୁ କମ୍) |ଏହି ବ feature ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଏହାକୁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ କରିଥାଏ ଯେଉଁଠାରେ DTT ର ଅଧିକ ଏକାଗ୍ରତା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ପ୍ରତିକୂଳ ଅଟେ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ RT-PCR) |
Aନିବେଦନ
ଏହି ଉତ୍ପାଦକୁ ଯେକ any ଣସି ପରୀକ୍ଷଣରେ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ ଯେଉଁଠାରେ RNA ଅବକ୍ଷୟକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ RNase ହସ୍ତକ୍ଷେପ ସମ୍ଭବ, ଯେପରିକି:
1.CDNA, RT-PCR, RT-qPCR ଇତ୍ୟାଦିର ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡର ସିନ୍ଥେସିସ୍ |
2.ଭିଟ୍ରୋ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ / ଅନୁବାଦ (ଯଥା, ଭିଟ୍ରୋ ଭାଇରାଲ୍ ନକଲ ପ୍ରଣାଳୀ) ସମୟରେ RNA କୁ ଅବକ୍ଷୟରୁ ରକ୍ଷା କରିଥାଏ |
3.RNA ପୃଥକତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ସମୟରେ RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ପ୍ରତିବନ୍ଧକ |
ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା
ଉତ୍ପାଦଟି -25 ～ - 15 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ, 2 ବର୍ଷ ପାଇଁ ବ valid ଧ |
ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ବଫର୍ |
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT ଏବଂ 50% glycerol |
ୟୁନିଟ୍ ସଂଜ୍ଞା
5ng ର ରିବୋନୁକ୍ଲାଇଜ୍ A ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ 50% ରୋକିବା ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ହେଉଥିବା ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟରର ପରିମାଣକୁ ଏକ ୟୁନିଟ୍ (U) ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଥିଲା |
ପ୍ରୋଟିନର ମଲିକୁଲାର ଓଜନ |
ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟରର ମଲିକୁଲାର୍ ଓଜନ ହେଉଛି 50 kDa |
ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ
Exonuclease କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:
40 U ର ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର ସହିତ 1 μg λ -Hind III ହଜମ ଡିଏନ୍ଏ 37 37 ରେ 16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇ ନାହିଁ।
ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:
16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 1μ g λ DNA ସହିତ 40 U ର ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର, କ ag ଣସି ଅବକ୍ଷୟ କରେ ନାହିଁ ଯେପରି ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ |
ନିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:
16 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 37μ ରେ 1μ g pBR322 ସହିତ 40U ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର କ no ଣସି ଅବନତି ଘଟାଏ ନାହିଁ |
RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ:
37U ରେ 4h ପାଇଁ 1.6μ g MS2 RNA ସହିତ 40U ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର କ ag ଣସି ଅବକ୍ଷୟ କରେ ନାହିଁ ଯେପରି ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |
E.coli DNA:
E. coli 16S rRNA ଲୋକସ୍ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ସହିତ TaqMan qPCR ବ୍ୟବହାର କରି E. coli ଜେନୋମିକ୍ DNA ର ଉପସ୍ଥିତି ପାଇଁ 40 U ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର ସ୍କ୍ରିନ କରାଯାଏ |E. coli genomic DNA ପ୍ରଦୂଷଣ ହେଉଛି ≤ 0.1 pg / 40 U.
Notes
1. ହିଂସାତ୍ମକ ଦୋହରିବା କିମ୍ବା ଘାଣ୍ଟିବା ଦ୍ୱାରା ଏନଜାଇମ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇପାରେ |
2. ଏହାର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ପରିସର 25-55 was ଥିଲା, ଏବଂ ଏହା 65 ℃ ଏବଂ ତଦୁର୍ଦ୍ଧରେ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇଯାଇଥିଲା |
3. RNase H, RNase 1 ଏବଂ RNase T1 ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମୁରିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ହୋଇନଥିଲା |
4. RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ବିଭିନ୍ନ pH (pH 5-9 ସମସ୍ତ ସକ୍ରିୟ) ରେ ମିଳିଥିଲା ଏବଂ pH 7-8 ରେ ସର୍ବାଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା |
5. ଯେହେତୁ ରିବନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ସାଧାରଣତ den ଡେନାଟରିଂ ଅବସ୍ଥାରେ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବଜାୟ ରଖେ, RNase Inhibitor ଅଣୁଗୁଡିକ ଡେନାଟରିଂ ନକରିବା ପାଇଁ ଯତ୍ନବାନ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ ଯାହା ଏକ ରିବନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ସହିତ ଜଟିଳ ହୋଇଛି |ସକ୍ରିୟ ରିବନୁକ୍ଲାଇଜ୍ ରିଲିଜକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ, 50 ° C ରୁ ଅଧିକ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ୟୁରିଆ କିମ୍ବା ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଡେନାଟରିଂ ଏଜେଣ୍ଟଗୁଡିକର ଅଧିକ ଏକାଗ୍ରତାକୁ ଏଡାଇବା ଉଚିତ୍ |
